Rhod-2AM 是一種常應(yīng)用于細(xì)胞鈣離子檢測(cè)的熒光探針，尤其在 線粒體鈣信號(hào)(Mitochondrial Ca²? Signaling) 研究中具有優(yōu)勢(shì)，在細(xì)胞生物學(xué)研究中發(fā)揮著重要作用。
1.為什么選擇 Rhod-2AM 研究線粒體鈣？
高靈敏度：對(duì)低濃度 Ca²?(~nM-μM 范圍)響應(yīng)靈敏。
線粒體靶向性：優(yōu)于其他鈣探針(如 Fluo-4、Fura-2)，減少胞質(zhì)信號(hào)干擾。
雙模式檢測(cè)：適用于熒光顯微鏡(實(shí)時(shí)成像)和流式細(xì)胞術(shù)(群體分析)。
多通道兼容性：可與綠色熒光探針(如Fluo-4 AM)或藍(lán)色核染料(如Hoechst)聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)多參數(shù)分析。
2.應(yīng)用場(chǎng)景示例
線粒體鈣與細(xì)胞凋亡：檢測(cè)凋亡刺激(如 STS)下線粒體鈣超載與 mPTP 開放的關(guān)系。
能量代謝研究：結(jié)合 Seahorse 分析儀，關(guān)聯(lián)鈣信號(hào)與 OXPHOS 效率。
神經(jīng)元活動(dòng)：研究突觸后線粒體鈣瞬變(如與電生理聯(lián)用)。
3.使用技巧與注意事項(xiàng)
3.1優(yōu)化染色條件
A.細(xì)胞密度：建議1X105 cells/mL，避免過度擁擠影響染料加載。
B.孵育時(shí)間：30-45分鐘(37℃)，過長(zhǎng)可能導(dǎo)致染料外排或細(xì)胞毒性。
3.2干擾因素控制
A. 避免使用含血清培養(yǎng)基(酯酶活性干擾)，加載后清洗減少背景信號(hào)。
B. 線粒體膜電位崩潰劑(如CCCP)可驗(yàn)證染料定位特異性。
3.3數(shù)據(jù)分析：
使用比率法(如與TMRM聯(lián)用)校正膜電位變化對(duì)熒光強(qiáng)度的影響。
圖示：
圖2.利用激光掃描共聚焦顯微鏡分析了細(xì)胞內(nèi)游離 Ca2+ 的分布情況。
細(xì)胞內(nèi)游離 Ca2+ 通過紅色熒光探針Rhod-2 AM進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞核用 DAPI(藍(lán)色)染色。攜帶 eGFP 報(bào)告基因的 pEZ-LV203 載體產(chǎn)生了綠色熒光蛋白。
