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山東萊恩德智能科技有限公司
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便攜式酶標儀檢測方法
2023-5-29 閱讀(369)
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近年來，便攜式酶標儀在臨床實驗室中的應用越來越普及，使得酶免疫分析法(EIA)的自動化程度愈來愈高，尤其是近幾年，進口的、國產(chǎn)的單、多通道全自動酶標儀的種類及型號發(fā)展非常迅猛，是臨床實驗室自動化程度繼生化分析儀、血細胞計數(shù)儀、血凝儀等之后的又一次更新和提高。然而，國內(nèi)外有關(guān)酶標儀性能系統(tǒng)評價的方法甚少，有的評價指標簡單且不全面，有的對其性能評價所采用的方法不盡一致，導致不同儀器之間、廠家與用戶之間、用戶與用戶之間的評價指標缺乏可比性，這是由于酶標儀在制造工藝(多通道檢測器)、測定原理(垂直光路光度測定法)與其它水平光路光度測定的儀器(721分光光度計)之間存在著很大的差別。因此，我們對國內(nèi)外幾個不同廠家和型號的儀器經(jīng)過系統(tǒng)研究論證，初步建立了一套較為完善的酶標儀性能評價指標與鑒定的基本方法。經(jīng)初步應用，效果滿意，應廣大讀者和用戶的要求，擬將酶標儀性能評價與鑒定方法的理論及其原理作一介紹和補充，以供同行在評價、鑒定和使用儀器時參考，從而為進一步提高檢測結(jié)果的室內(nèi)重復性和室間可比性提供可靠的保證。
方法:
一、濾光片波長精度檢查及其峰值測定
方法及其衡量的標準：用高精度紫外可見分光光度計(波長精度±0.3nm)對不同波長的濾光片進行光譜掃描，檢測值與標定值之差即為濾光片波長精度，其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好，波長精度越高。
二、靈敏度和準確度的監(jiān)測
方法：①靈敏度：配制6ug/ml重鉻酸鉀(干燥)溶液(0.05mo1/L硫酸溶解)，加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中，以0.05mo1/L硫酸溶液作空白，于450nm(參比波長650nm)測定，其吸光度應≥0.01A。②準確度：準確配制：1mmo/L對硝基(提純品)水溶液，然后以10mmo1/L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之，加入200ul稀釋液于小孔杯中，以10mmo1/LNaOH溶液作空白，于405nm(參比波長650nm)檢測，其吸光度應在0.4A(0.395～0.408A)左右。
三、通道差與孔間差檢測
方法及其表達方式：①通道差檢測：取一只酶標板小孔杯(杯底須光滑、透明、無劃痕、無污染)以酶標板架作載體，分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200u*后置于8個通道的相應位置，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(測定波長490nm，參比波長630或650nm，以下均相同)連續(xù)測三次，觀察其不同通道之間測量結(jié)果的一致性可用極差值來表示其通道差。②孔間差的測量：選擇同一廠家、同一批號酶標板條(8條共96孔)分別加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)0.065～0.070A)先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。
四、零點飄移
方法：取八只小孔杯，分別置于八個通道的相應位置，均加入200ul蒸餾水并調(diào)零，采用雙波長或單波長(490nm)每隔30min測定一次，觀察8個通道4h內(nèi)的吸光度變化。其與零點的差值即為零點飄移。
五、精密度評價
方法及評價指標：每個通道三只小杯，分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長作雙份平行測定，每日測定兩次，連續(xù)測定20天。分別計算其批內(nèi)精密度、日內(nèi)批間精密度、日間精密度和總精密度及相應的CV值。
六、線性測定
方法：稱取甲基橙配制5個系列濃度的溶液，采用雙波長平行檢測8次求其均值。計算回歸方程、相關(guān)系數(shù)r及標準估計誤差Sy,x，并用±1.96Sy,x表示樣品的95%測量范圍。
七、雙波長評價
方法：在運用酶標儀檢測樣品時，由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等，這些都是儀器測定過程中常見的干擾因素，而標本中的干擾組份(如溶血、黃道)因洗滌而對測定結(jié)果影響則較小，因此我們將文獻中的雙被長評價方法改為：取同一廠、同一批號酶標板條(每個通道2條共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)0.065～0.070A)先后于8個通道分別采用單波長(490nm)和雙波長(測定波長490nm、參比波長630/650nm)進行檢測，計算單波長和雙波長測定結(jié)果的均值、離散度，比較各組之間是否具有統(tǒng)計學差異以考察雙波長清除干擾因素的效果。
