ELISA生物學測試是一種實驗診斷方法,具有高靈敏度,特異性強和重現(xiàn)性好的特點。由于其試劑穩(wěn)定,易于保存,易于操作且結果判斷更加客觀,因此已廣泛用于免疫學檢測的各個領域。兔子催乳素(PRL)ELISA試劑盒適用于在人血清或血漿中對人戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體進行體外定性檢測。
在實驗中,樣品制備也很重要。操作不良可能會影響實驗結果。如何準備樣品?接下來,我們就向你介紹兔子催乳素(PRL)ELISA試劑盒樣品的制備方法。
1.細胞培養(yǎng)物上清液
?、賹⑴囵B(yǎng)基移至離心管,4℃,1,500rpm離心10分鐘;
②立即進行上清液的分裝(血清)并在-80℃下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數(shù)。
2.細胞提取物
?、賹⒔M織培養(yǎng)板放置在冰上;
?、谖雠囵B(yǎng)基并用預冷PBS輕輕洗滌細胞一次;
?、畚鯬BS,加入100mm培養(yǎng)板加入0.5ml*提取緩沖液;
④收集細胞至在傾斜板中,然后移至經(jīng)過預冷的離心管中;
?、荻虝簻u旋后在冰上孵育15-30分鐘;
?、拊?℃下13,000xrpm離心10分鐘,沉淀不溶性內(nèi)容物;
?、邔⑸锨逡海ㄟ@里是指可溶性細胞提取物)分裝至預冷的離心管中,并于-80℃保存,盡可能減少反復凍融次數(shù)。
3.條件培養(yǎng)基
?、賹⒓毎臃N到*(含血清)生長培養(yǎng)基中,使細胞增殖達到一定的融合率;
?、跅壢ヅ囵B(yǎng)基,數(shù)毫升預熱PBS小心洗滌,重復洗滌步驟;
?、蹢壢BS洗滌液并小心加入無血清培養(yǎng)基;
?、芊跤?-2天;
?、輰⑴囵B(yǎng)基移至離心管,4℃1,500rpm離心10分鐘;
⑥立即分裝上清液(血清)并在-80℃下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數(shù)。
4.乳汁
?、偈占瘶悠凡⒃?℃下以10,000xg離心2分鐘;
?、诜盅b上清液并在-80℃下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數(shù)。
5.血漿
①將全血收集到含抗凝劑的管中,例如BD抗凝真空采血管或添加0.1M檸檬酸鈉至1/10終體積;
?、?℃3,000rpm離心10分鐘;
?、哿⒓捶盅b上清液(血漿)并在-80℃下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數(shù)。
6.尿液
?、偈占瘶悠凡⒃?℃下以10,000xg離心2分鐘;
②等分上清液(血清)并在-80℃下保存樣品,盡可能減少凍融循環(huán)次數(shù)。
7.唾液
?、偈占瘶悠凡⒃?℃下以10,000xg離心2分鐘;
?、诹⒓捶盅b上清液(血漿)并在-80℃下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數(shù)。
8.血清
①將全血收集到未經(jīng)處理的測試管中,或者到不含抗凝劑的管中,如BD血清用真空采血管;
②在室溫下連續(xù)孵育20分鐘;
③4℃3,000rpm離心10分鐘;
④立即分裝上清液(血漿)并在-80℃下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數(shù)。
9.兔子催乳素(PRL)ELISA試劑盒組織提取物
?、儆酶蓛舻墓ぞ呓馄式M織,best好在冰上、盡快進行,以防止被蛋白酶降解;
?、趯⒔M織置于圓底的微量離心管中,并浸入液氮中進行“速凍”,將樣品保存在-80℃下以便后續(xù)使用或放置在冰上進行直接勻漿;
?、蹖τ诩s5mg的組織片,可向管中添加約300μl*提取緩沖液(查看細胞/組織提取緩沖液配方),然后用電動勻漿器勻漿;
?、芮逑吹镀瑑纱?,每次清洗使用300μl*提取緩沖液,然后在4℃下維持恒定攪拌2小時(例如置于冷室中的回旋振蕩器上);
?、?℃13,000xrpm離心20分鐘。置于冰上,將上清液(這里是指可溶的蛋白質提取物)分裝至新、預冷的管中并在-80℃下保存樣品。盡可能減少反復凍融次數(shù)。