人基質金屬蛋白酶4（MMP-4）ELISA試劑盒適用于血清、血漿、唾液、尿液、細胞培養(yǎng)上清等多個樣本。遵循一定的操作事項是確定其使用效果的基本要求。
人基質金屬蛋白酶4（MMP-4）ELISA試劑盒使用方法：
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；每孔再加入酶標工作液100μL；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次。
6、顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，37℃避光顯色15min。
7、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應。
8、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
9、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
人基質金屬蛋白酶4（MMP-4）ELISA試劑盒注意事項：
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。
5、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜。
6、試劑盒保質期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用。
7、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
