大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）酶聯(lián)免疫 ）酶聯(lián)免疫分析

檢測范圍：：：： 96T

10µg/L-240µg/L

使用目的：：：：

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）水平。用純化的大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13），再與 HRP 標記的基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）抗體結(jié)合，形成抗體抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）濃度。

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品z終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘

10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。