檢測系統(tǒng)是用于免疫反應(yīng)研究和試劑盒生產(chǎn)的敏感技術(shù)，發(fā)揮著非常重要的作用。雖然小鼠熱休克因子1（HSF1）ELISA試劑盒操作過程看起來比較簡單，但實驗過程有很多要求。在實驗室里，試劑的制備一般都不太重視。一般的做法是在實驗過程中把試劑從冰箱里拿出來立即使用，而忽略了這種做法可能會影響后續(xù)孵化時間的問題。直接的結(jié)果是，對一些弱陽性樣品的檢測出現(xiàn)假陰性。
因此，小鼠熱休克因子1（HSF1）ELISA試劑盒測定中的試劑準(zhǔn)備最重要的是在實驗前將試劑盒從冰箱中取出，在室溫下放置20min以上，然后再進(jìn)行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的是為了使反應(yīng)微孔中的溫度在隨后的孵化反應(yīng)中迅速達(dá)到要求的高度，從而達(dá)到測定的要求。
目前，ELISA試劑盒中的洗板液在實驗室使用時需要通過稀釋提供的濃縮液來配制，所以稀釋用的蒸餾水或去離子水的質(zhì)量應(yīng)得到保證。當(dāng)試劑盒使用OPD作為底物時，應(yīng)在反應(yīng)和顯色前臨時制備底物溶液。其實，不僅是ELISA實驗，每個試劑實驗都是一樣的。它需要按照程序來操作。在使用前，一定要閱讀說明書，并對每個實驗進(jìn)行總結(jié)，這樣才能使實驗更加完整、美觀。
小鼠熱休克因子1（HSF1）ELISA試劑盒實驗過程中的注意事項如下。
1、正式試驗時，應(yīng)分別用陽性對照和陰性對照控制試驗條件，待測樣品應(yīng)一式兩份，以保證試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時背景高，說明有非特異性反應(yīng)，可用羊血清、兔血清或BSA封存。
2、在ELISA中，選擇各種實驗條件是很重要的，包括。
?。?）固體載體的選擇。許多物質(zhì)可以作為固體載體，如PVC、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺和纖維素。它的形式可以是凹板、試管、珠子等。目前，常用的是40孔聚苯乙烯凹板。無論哪種載體，在使用前都可以進(jìn)行篩選：涂上等量的抗原，在相同的實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顏色反應(yīng)是否均勻，從而判斷其吸附性能是否良好。
?。?）包被抗體（或抗原）的選擇?？贵w（或抗原）在固體載體表面吸附時，要求其純度好，PH值一般要求在9.0～9.6之間。吸附溫度、時間和蛋白質(zhì)含量也有一定影響。一般情況下，4℃下使用18-24小時。蛋白質(zhì)包衣的濃度需要滴定：即不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μG/ml等），在其他試驗條件相同的情況下，觀察陽性樣品的OD值。選擇OD值大而蛋白質(zhì)少的濃度。通常1～10為大多數(shù)蛋白質(zhì)μg／ml。
