DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。DH10B菌株來源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突變使DH10B菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(無論真核生物還是原核生物的基因組DNA都能被高效的轉(zhuǎn)入DH10B中)。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA 的提取。中80dlacZM15標(biāo)記的存在使DH10B可用于藍(lán)白斑篩選，rpsL賦予其-lianmeisu抗性。DH10B感受態(tài)細(xì)胞適用于大質(zhì)粒的構(gòu)建或者各種文庫構(gòu)建，經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>10"cfu/μg DNA?；蛐蜑?F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) ф80lacZΔM15ΔlacX74recAl endAlaraD139 △(ara, leu)7697 galE15 galK λ-rpsL nupG

操作方法:

1.0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5min,待其瀝干水分,正置5min,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實(shí)冰面,電極杯頂離冰面0.5cm 以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5min充分降溫。

2.取-70℃保存的DH10B電擊感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5min,待其融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接

產(chǎn)物)并用手boda離心管底輕輕混勻,避免產(chǎn)生氣泡,立即插入冰中。