會(huì)員.png)
6
丙酮酸是細(xì)胞內(nèi)代謝途徑中的重要化合物。它源自稱為糖酵解的葡萄糖代謝。一分子葡萄糖分解成兩分子丙酮酸，從而通過(guò)兩種方式之一為活細(xì)胞提供能量。當(dāng)存在氧氣（有氧呼吸）時(shí)，丙酮酸通過(guò)丙酮酸脫氫酶轉(zhuǎn)化為乙酰fumeiA，丙酮酸脫氫酶進(jìn)入檸檬酸循環(huán)（也稱為Krebs循環(huán)）以生成ATP。當(dāng)氧氣不足時(shí)，丙酮酸會(huì)厭氧分解，從而在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生乳酸，在植物和微生物中產(chǎn)生乙醇。丙酮酸的異常水平，或乳酸與丙酮酸的濃度比可能與肝病或代謝異常有關(guān)，這是患者臨床和其他實(shí)驗(yàn)室研究中的診斷指標(biāo)。AAT Bioquest' s Amplite™比色丙酮酸測(cè)定試劑盒提供了靈敏的比色測(cè)定法，用于定量樣品中的丙酮酸。它利用酶偶聯(lián)反應(yīng)釋放過(guò)氧化氫，可通過(guò)丙酮酶?jìng)鞲衅魍ㄟ^(guò)酶標(biāo)儀在575 nm處檢測(cè)到過(guò)氧化氫。
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 組件A：Quest Fluor™丙酮酸傳感器 | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B1：酶混合物1 | 2瓶（凍干粉） |
| 組分B2：酶混合物2 | 2瓶（凍干粉） |
| 組分C：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（10毫升） |
| 組分D：丙酮酸標(biāo)準(zhǔn) | 1小瓶（100 mM，100 µL） |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（100 µL） |
準(zhǔn)備測(cè)試樣品（50 µL）以及連續(xù)稀釋的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（50 µL）
加入等體積的丙酮酸工作溶液（50 µL）
在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)
監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm的熒光強(qiáng)度
重要說(shuō)明
為了獲得*效果，強(qiáng)烈建議使用黑色印版。使用前在室溫下解凍套件組件。儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Quest Fluor™丙酮酸鹽傳感器儲(chǔ)備溶液（200X）：
將50 µL DMSO（組分E）添加到Quest Fluor™丙酮酸鹽傳感器（組件A）中，制成200X Quest Fluor™丙酮酸鹽傳感器儲(chǔ)備溶液。2.丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mM）：
將10 µL 100 mM丙酮酸（組分D）添加到990 µL PBS（pH 7）中，得到1 mM丙酮酸溶液。配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
將100 µL的1 mM丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)溶液加入900 µL PBS中制成100 µM丙酮酸溶液（PS7）。然后執(zhí)行1：3的系列稀釋，以獲得系列稀釋的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品（PS6-PS1）。
準(zhǔn)備工作溶液
1.將5 mL測(cè)定緩沖液（組分C）加入一瓶酶混合1瓶（組分B1）中；混合均勻。
2.將100μLddH 2 O加入一個(gè)酶混合物2小瓶（組分B2）中；混合均勻。
3.將整個(gè)小瓶（100μL）的Enzyme Mix 2和25 uL的200X Quest Fluor™丙酮酸傳感器儲(chǔ)備溶液轉(zhuǎn)移到Enzyme Mix 1瓶中。拌勻 注意：丙酮酸工作溶液不穩(wěn)定，應(yīng)立即使用。避光。程序
表1.黑色96孔微孔板中丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。PS =丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（PS1-PS7，0.1至100 µM）；BL =空白對(duì)照；TS =測(cè)試樣品。
BL BL TS TS PS1 PS1 ... ... PS2 PS2 ... ... PS3 PS3 PS4 PS4 PS5 PS5 PS6 PS6 PS7 PS7 表2.每個(gè)孔的試劑組成。
好 體積 試劑 PS1-PS7 50微升 連續(xù)稀釋（0.1至100 µM） BL 50微升 PBS TS 50微升 樣品 根據(jù)表1和表2提供的布局，將丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（PS），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）制備成黑色的96孔微孔板。對(duì)于384孔板，請(qǐng)使用25 µL每孔試劑，而不是50 µL。
在丙酮標(biāo)準(zhǔn)液，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中加入50 µL丙酮酸工作溶液，使丙酮酸測(cè)定總體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，將25 µL工作溶液加到每個(gè)孔中，總體積為50 µL /孔。在pH值為6.5至7.0的條件下進(jìn)行丙酮酸測(cè)定。
將反應(yīng)混合物在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)。
使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 540/590 nm（截止：570 nm）下監(jiān)測(cè)熒光的增加。
13820 Amplite™熒光法丙酮酸檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Fluorimetric Pyruvate Assay Kit 200 Tests 13821 Amplite™比色法丙酮酸檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Colorimetric Pyruvate Assay Kit 200 Tests 13825 Amplite™熒光法L-bingansuan檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Fluorimetric L-Alanine Assay Kit 200 Tests 13826 Amplite™比色法L-bingansuan檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Colorimetric L-Alanine Assay Kit 200 Tests 13827 Amplite™熒光法L-天mendongansuan（天冬氨酸）檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Fluorimetric L-Aspartate (Aspartic Acid) Assay Kit 200 Tests
