分光光度計(jì)是一款將成分復(fù)雜的光，分解為光譜線的科學(xué)儀器，采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。
因?yàn)閰⒈热芤簩?duì)光會(huì)存在一定的吸收，所以在比色前通常要將這部分吸收扣除，才更接近被測(cè)組分對(duì)光的吸收值，這樣才能通過(guò)校正曲線來(lái)算得被測(cè)組分的濃度。分光光度計(jì)在進(jìn)行光度測(cè)量時(shí)，利用參比溶液來(lái)調(diào)節(jié)儀器的零點(diǎn)，可以消除由于吸收池壁及溶劑對(duì)入射光的反射和吸收帶來(lái)的誤差，并扣除干擾的影響。參比溶液可根據(jù)下列情況來(lái)選擇。
分光光度計(jì)參比溶液的選擇
1、溶劑
試樣組成簡(jiǎn)單，共存組分對(duì)測(cè)定波長(zhǎng)的光無(wú)吸收。
2、試劑
顯色劑或其它試劑對(duì)測(cè)定波長(zhǎng)有吸收，按顯色反應(yīng)相同的條件，不加入試樣的試劑。
3、試液
試樣基體溶液在測(cè)定波長(zhǎng)有吸收，顯色劑自身無(wú)色，可按與顯色反應(yīng)相同的條件處理試樣，只是不加入顯色劑。
4、平行操作參比
用不含被測(cè)組分的試樣，在相同的條件下與被測(cè)試樣同時(shí)進(jìn)行處理，得到平行操作參比溶液。
如在進(jìn)行某種藥物濃度監(jiān)測(cè)時(shí)，取正常人的血樣與待測(cè)血藥濃度的血樣進(jìn)行平行操作處理，前者得到的溶液即可作為平行操作參比溶液。
注意事項(xiàng)
1、當(dāng)試劑及顯色劑均無(wú)色時(shí)，可用蒸餾水作參比溶液。
2、顯色劑有顏色，可選擇不加試樣溶液的試劑空白作參比溶液。
3、顯色劑為無(wú)色，而被測(cè)試液中存在其它有色離子，可用不加顯色劑的被測(cè)試液作為參比溶液。
4、顯色劑和試液均有顏色，可將一份試液加入適當(dāng)掩蔽劑，將被測(cè)組分掩蔽起來(lái)，使之不再與顯色劑作用，而顯色劑及其它試劑均按試液測(cè)定方法加入，以此作為參比溶液，這樣就可以消除顯色劑和一些共存組分的干擾。
5、改變加入試劑的順序，使被測(cè)組分不發(fā)生顯色反應(yīng)，可以把此溶液作為參比溶液消除干擾。
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