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上海雅吉生物科技有限公司

主營產品: 培養(yǎng)原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒

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13-190901-人Y染色體性別決定區(qū)(SRY)PCR試劑盒使用手冊

2021-7-13  閱讀(1577)

產品及特點

Y 染色體上 95%是男性特異區(qū)域,里面含和男性有關的基因。SRY 基因

Sex-determining Region on Y Chromosome SRY),雄性的性別決定基因,指 Y 染色體上具體決定生物雄性性別的基因片段。人的 SRY 基因位 Yp11.3,只含有一個外顯子,沒有內含子,轉錄單位長約 1.1kb,編碼一 204 氨基酸的蛋白質。本產品是根據(jù) PCR 原理開發(fā),它具有下列特點:

  • 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增 SRY 基因。

3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。

規(guī)格及成分

 

編號

十孔盒包裝

PCR MagicMix 3.0

90805

1 mL(紅蓋

超純水

100935

1 mL(亮黃色

 Y 染色體性別決定區(qū)

(SRY)PCR 引物混合液

13-190901yw

100 μL白蓋

 Y 染色體性別決定區(qū)

(SRY)PCR 陽性對照

1×10E8 拷貝/μL

60908-190901pc

50 μL黃蓋

使用手冊

13-190901sc

1 份

運輸及保存

低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,不要污染其

他試劑。

自備試劑

樣品 DNA。

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

  • 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。
  • 如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量中加 10μL 人 Y 染色體性別決定區(qū)(SRY)PCR 陽性對照 100 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設置PCR 反應40μL 體系

  •  N+2 個樣品,在PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照,故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個PCR 管中分別加入下列成分:

 

 

 

成分

N+2 個

樣品管

PCR 陰性

對照

PCR 陽性

對照

 

PCR Magic Mix 3.0

 20 μL

20 μL

20 μL

 Y 染色體性別決定區(qū)

SRYPCR 引物混合液

 2 μL

2 μL

2 μL

N+2 個樣品 DNA 模板

 18 μL

-

-

PCR 陰性對照水)

-

18 μL

-

PCR 陽性對照 Y 染色體性別決定區(qū)(SRY) PCR 陽性對照的 100 倍

稀釋液)

 

-

 

-

 

18 μL

4. 按下表設置 PCR 反應:

三、電泳檢測

  •  10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 擴增結束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽性對照必須有 232bp 大小的條帶出現(xiàn),陰性對照必須無任何擴增,否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除PCR 抑制劑的感染。

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