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上海雅吉生物科技有限公司
主營產品： 培養(yǎng)原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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微球數(shù)量太少？這三點一定要注意
2021-1-8 閱讀(681)
提及多因子的定量檢測，越來越多的小伙伴會一個想到 Luminex 技術。Luminex 基于微球設計原理，可以在 1 張 96 孔板中定量檢測多達 100 種分析物，僅需少量樣本，節(jié)約時間、經(jīng)費，可謂一舉多得。
R&D Systems® 擁有 Luminex Assay 以及 Luminex High Performance Assay 兩個產品系列，均基于帶有顏色編碼的微球，這些微球表面包被了識別不同目標分析物的特異性抗體。當預包被的微球與待檢樣本孵育時，分析物被微球捕獲，經(jīng)由生物素標記的特異性檢測抗體混合物識別，加入鏈霉親和素 - PE 熒光素底物后發(fā)光并進行定量檢測。
01 樣品粘稠，未有效稀釋
解決方法：測定前，如果是凍存的血清 / 血漿樣品，一步需將樣品充分解凍(如果樣本包含碎片的話也會影響數(shù)據(jù)的讀取)。建議在加樣前，將樣本進行 16,000 x g 離心 4 分鐘，特殊情況下可能要離心更長的時間，再用 Calibrator diluent 按照建議的稀釋比對樣本進行稀釋。
02 進樣針孔堵塞，進樣針高度不正確
解決方法：以上兩種情況都會導致沒有充足的微球進入，前者需用超聲的方法清洗針孔，如有需要進行替換；后者需確定進樣針的高度并調整至合適位置。
也可以進入維護頁面，點擊 Cmds&Routines，使用 0.1 N NaOH 運行深度清洗。
03 操作有誤，清洗步驟中孔板未附磁力架
解決方法：這是新手常常會出現(xiàn)的失誤。對于磁珠形式的微球，切記清洗時整個過程都要附有磁力架，確定磁力架正確地結合在微孔板上，洗板時磁力架應置于微孔板底部，棄去洗滌液前應靜置 1 分鐘。不要吸干，以防止磁珠丟失。
如果磁珠數(shù)量少，建議不要用自動洗板機清洗，我們發(fā)現(xiàn)自動洗板機清洗可能會造成磁珠聚集，從而影響其數(shù)量。
在實際的 Luminex 實驗操作中，有客戶經(jīng)常碰到微球數(shù)少于 50 個甚至只有幾個的問題，極大地影響了實驗結果，其可能的原因和解決方法有哪些呢？
