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RCA滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒說明書

2020-12-24  閱讀(1713)

RCA滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒說明書

滾環(huán)擴(kuò)增(rolling circle amplification,RCA)是近幾年發(fā)展起來的種核酸恒溫?cái)U(kuò)增方法。以環(huán)狀DNA為模板,通過個(gè)短的DNA引物(與部分環(huán)狀模板互補(bǔ)),在phi29 DNA 聚合酶催化下將dNTPs轉(zhuǎn)變成單鏈DNA,此單鏈DNA包含成百上千個(gè)重復(fù)的模板互補(bǔ)片段。這種方法不僅可以直接擴(kuò)增DNA和RNA,還可以實(shí)現(xiàn)對靶核酸的信號(hào)放大,靈敏度達(dá)到個(gè)拷貝的核酸分子,因此在核酸檢測中具有很大的應(yīng)用價(jià)值和潛力。 因其高靈敏度、高特異性和可操作性,RCA技術(shù)在基礎(chǔ)研究、實(shí)際檢測、醫(yī)療診斷及納米材料等方面都有很好的應(yīng)用,結(jié)合細(xì)胞原位檢測、單核苷酸多態(tài)性SNPs,蛋白質(zhì)分析、免疫芯片和全基因組的擴(kuò)增等研究都能發(fā)揮其巨大的優(yōu)勢。
RCA滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒說明書滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒配備的phi29 DNA聚合酶具有鏈置換和連續(xù)合成特性,可連續(xù)合成長達(dá)70kb的DNA。另外,該酶具有3’→5’外切酶校讀功能,合成的DNA保性高。試劑盒配備的Random Hexamers為6堿基隨機(jī)引物可對目標(biāo)分子進(jìn)行指數(shù)放大(通常放大10000倍)。
滾環(huán)擴(kuò)增

主要特征

  • 高靈敏度:單引物RCA的擴(kuò)增效率成指數(shù)擴(kuò)大,可達(dá)104-105。
  • 操作簡單:恒溫?cái)U(kuò)增,程序簡單化。
  • 儀器簡單:只需維持恒溫的水浴鍋。
  • 應(yīng)用廣泛:可廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和醫(yī)療診斷等域。

RCA滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒說明書組分

名稱100T
phi29 DNA Polymerase (20 U/μl)50 μl
10×phi29 Buffer1 ml
Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl)25 μl
10mM dNTP Mixture200 μl
25XRandom Hexamer100 μl

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年,避免反復(fù)凍融。

RCA滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒說明書實(shí)例

1. 應(yīng)用本試劑盒以pEasy質(zhì)粒為模板, 30℃作用5h。泳道1-5是模板濃度分別為0.0004,0.004, 0.04,0.4,1 ng/μl ,泳道6-10分別為泳道1-5相對應(yīng)的RCA產(chǎn)物用PstI酶切后的產(chǎn)物,M 為D10000 DNA Marker。

RCA滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒

2. 應(yīng)用本試劑盒以人基因組為模板, 30℃作用5h。泳道1-6是模板濃度分別為 0.0004,0.002,0.004,0.04,0.4,1 ng/μl ,M 為D10000 DNA Marker。

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