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上海雅吉生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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總RNA的提?。═rizol法提取）
2019-12-3 閱讀(466)
在收集到生物材料之后，能即可進(jìn)行RNA制備工作。若需暫時(shí)儲(chǔ)存，則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后，儲(chǔ)存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時(shí)，將儲(chǔ)存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。
1. 提取組織RNA時(shí)，每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解：提取細(xì)胞RNA時(shí)，先離心沉淀細(xì)胞，每5~106個(gè)細(xì)胞加1ml Trizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細(xì)胞；
2. 將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中，在試問15~30℃下放置5分鐘；
3. 在上述EP管中，按照每1ml Trizol后加0.2ml的量加入，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15秒，在室溫下（15~30℃）放置2~3分鐘后，12000g（2~8℃）離心15分鐘；
4. 去上層水相置于新EP管中，按照每1ml Trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15~30℃）放置10分鐘后，12000g（2~8℃）離心10分鐘；
5. 棄上清，按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇進(jìn)行洗滌，渦旋混合，7500g（2~8℃）離心5分鐘，棄上清；
6. 讓沉淀的RNA在室溫在自然干燥；
7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。
