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上海雅吉生物科技有限公司

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總RNA的提?。═rizol法提?。?/h3>

2019-12-3  閱讀(465)

在收集到生物材料之后,能即可進(jìn)行RNA制備工作。若需暫時(shí)儲(chǔ)存,則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后,儲(chǔ)存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時(shí),將儲(chǔ)存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞,不可以先行解凍,以避免RNase的作用。

1. 提取組織RNA時(shí),每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解:提取細(xì)胞RNA時(shí),先離心沉淀細(xì)胞,每5~106個(gè)細(xì)胞加1ml Trizol后,反復(fù)用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細(xì)胞;

2. 將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中,在試問(wèn)15~30℃下放置5分鐘;

3. 在上述EP管中,按照每1ml Trizol后加0.2ml的量加入,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15秒,在室溫下(15~30℃)放置2~3分鐘后,12000g(2~8℃)離心15分鐘;

4. 去上層水相置于新EP管中,按照每1ml Trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15~30℃)放置10分鐘后,12000g(2~8℃)離心10分鐘;

5. 棄上清,按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇進(jìn)行洗滌,渦旋混合,7500g(2~8℃)離心5分鐘,棄上清;

6. 讓沉淀的RNA在室溫在自然干燥;

7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。



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