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土壤錳過(guò)氧化物酶(S-Mnp)試劑盒
土壤錳過(guò)氧化物酶(S-Mnp)試劑盒
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【簡(jiǎn)單介紹】
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土壤錳過(guò)氧化物酶(S-Mnp)試劑盒
錳過(guò)氧化物酶(EC1.11.1.13,Mnp)是真菌分泌的一種糖基化的胞外蛋白,含亞鐵血紅 素的過(guò)氧化物酶,主要存在于引起白腐的木腐菌和土壤枯草菌這兩個(gè)擔(dān)子真菌中,屬于木 質(zhì)素降解酶系

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本試劑盒僅供科研使用 1 土壤錳過(guò)氧化物酶(S-Mnp)試劑盒說(shuō)明書 (貨號(hào):WS0330F 分光法 24 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 錳過(guò)氧化物酶(EC1.11.1.13,Mnp)是真菌分泌的一種糖基化的胞外蛋白,含亞鐵血紅 素的過(guò)氧化物酶,主要存在于引起白腐的木腐菌和土壤枯草菌這兩個(gè)擔(dān)子真菌中,屬于木 質(zhì)素降解酶系,能有效的降解木質(zhì)素及廢水和環(huán)境中其他一些抗性物質(zhì),如腐殖質(zhì)酸和包 括多環(huán)芳烴在內(nèi)的多種有機(jī)污染物等。 土壤錳過(guò)氧化物酶(S-Mnp)在 Mn2+存在的條件下,將二甲氧基*酚(DMP)氧化生成 的產(chǎn)物在 470nm 處有特征吸收峰。通過(guò)檢測(cè)該產(chǎn)物在 470nm 處的增加速率,即可得到 Mnp 酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 30mL×1 4℃保存 試劑二 粉劑×1 4℃保存 用前甩幾下使粉劑落入底部,再加 8mL 無(wú)水乙醇溶解備用。 試劑三 粉劑×1 4℃保存 用前甩幾下使粉劑落入底部,再加 3mL 蒸餾水充分溶解備用。 試劑四 液體×1 4℃保存 用前甩幾下使液體落入底部,準(zhǔn)備 三個(gè)新的 EP 管:每管中加入 2µL 體,再加 1mL 蒸餾水混勻備用。 三、所需的儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、天平、 恒溫震蕩培養(yǎng)箱。 四、土壤錳過(guò)氧化物酶(S-Mnp)活性測(cè)定: 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本制備: 取新鮮土樣風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干,先粗研磨,過(guò) 40 目篩備用。 【注】:土壤風(fēng)干,減少土壤中水分對(duì)于實(shí)驗(yàn)的干擾;土壤過(guò)篩,保證取樣的均勻細(xì)膩; 2、上機(jī)檢測(cè): 1 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 470nm,蒸餾水調(diào)零。 2 所有試劑至常溫狀態(tài)。 3 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL測(cè)定管 對(duì)照管 土樣(g0.1 0.1 試劑一 400 680 試劑二 280 試劑三 40 40 試劑四 80 80 充分混勻,于 30℃震蕩反應(yīng) 2h,于 12000rpm,4℃離心 10min取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿中,讀取 470nm 處吸光值 A,本試劑盒僅供科研使用 2 A=A 測(cè)定管- A 對(duì)照管(每個(gè)樣本需做一個(gè)自身對(duì)照)。 【注】若A 值較低,可加大土壤樣本量或者延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,則改變后的樣本質(zhì)量 W 和反應(yīng)時(shí)間 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算: 酶活性定義:每克土壤每天氧化 1nmol DMP 所需酶量為一個(gè)酶活力單位。 S-MnP 活性(nmol/d/g 土樣)=(A÷ε÷d)×109× V÷W÷T=174.5×A÷W ε---DMP 被氧化的產(chǎn)物的摩爾消光系數(shù):55000L/mol/cm; d---96 孔板光徑,1cm; V---反應(yīng)總體積,8×10-4 L; W---樣本質(zhì)量,g; T---反應(yīng)時(shí)間,2h=1/12d



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