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上海宇淳生物科技有限公司

主營產(chǎn)品: PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑

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聯(lián)人:
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上海市南航公路1981弄72號(hào)
編:
鋪:
http://www.hg1112.cn/st606571/
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禽白血病病毒抗原檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法) 使用說明書.

2021-5-21  閱讀(990)

【產(chǎn)品名稱】

通用名:禽白血病病毒抗原檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

英文名:Test Kit for Antibodies to Poultry Avian leukosis virus (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒

【預(yù)期用途】禽白血病是由禽白血病病毒(Poultry Avian leukosis virus ,ALV)引起的能在禽類中導(dǎo)致不同致病型的腫瘤性疾病,能使大多數(shù)感染雞的生產(chǎn)性能下降,本病呈世界性分布,是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的最主要疫病之一。

    本試劑盒適用于:禽血清抗原的檢測,以確定被檢禽是否感染禽白血病毒。

【原理】

本試劑盒由預(yù)包被禽白血病病毒抗體的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用雙抗夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測禽血清或血漿中禽白血病病毒抗原。實(shí)驗(yàn)時(shí),在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢血清,再加入HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)溫育后,若樣品中含有禽白血病病毒抗原,則將與酶標(biāo)板上抗體結(jié)合,經(jīng)*洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后;在孔中加底物液TMB,與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗原含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有禽白血病病毒。

【試劑盒組成】

序號(hào)

名稱

規(guī)格/96T×1

1

微孔酶標(biāo)板

96

2

陰性對(duì)照

0.3mL

3

陽性對(duì)照

0.3mL

4

樣本稀釋液

6mL

5

檢測抗體-HRP

10mL

6

20×洗滌緩沖液

25mL

7

底物A

6mL

8

底物B

6mL

9

終止液

6mL

10

封板膜

2

11

說明書

1

12

自封袋

1個(gè)

13

微孔酶標(biāo)板

96

 

【儲(chǔ)存及有效期】 2~8℃保存,有效期6個(gè)月。

包被板開封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。

2.20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.

 

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。

3.陰性、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照50μl;樣品孔每孔加入待測樣本50μL,空白孔不加。

4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,靜置,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.甩去孔內(nèi)液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μL,蓋好蓋板膜,置37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),于450nm波長處測定各孔吸光值(A值),無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照≤0.2,陽性對(duì)照≥0.8。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1.C.O(臨界值)=0.25+陰性對(duì)照孔均值。

2.陽性判斷(Cut-Off值):陰性對(duì)照OD+0.15,樣本OD值大于閾值,判定為陽性,反之,為陰性。

【試驗(yàn)方法的局限性】

該試驗(yàn)僅作為定性檢測血清或血漿中禽白血病病毒。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。

3.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,以防水滴凝聚在冷板條上。未用完酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

6.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈,消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

7.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

9.不同批號(hào)試劑組分不得混用。



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