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禽白血病病毒抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 使用說明書.
2021-5-21 閱讀(990)
通用名：禽白血病病毒抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Poultry Avian leukosis virus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒
【預(yù)期用途】禽白血病是由禽白血病病毒（Poultry Avian leukosis virus ，ALV）引起的能在禽類中導(dǎo)致不同致病型的腫瘤性疾病,能使大多數(shù)感染雞的生產(chǎn)性能下降,本病呈世界性分布，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的最主要疫病之一。
本試劑盒適用于：禽血清抗原的檢測，以確定被檢禽是否感染禽白血病毒。
【原理】
本試劑盒由預(yù)包被禽白血病病毒抗體的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用雙抗夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測禽血清或血漿中禽白血病病毒抗原。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢血清，再加入HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)溫育后，若樣品中含有禽白血病病毒抗原，則將與酶標(biāo)板上抗體結(jié)合，經(jīng)*洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后；在孔中加底物液TMB，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗原含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽白血病病毒。
【試劑盒組成】
| 序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 |
| 1 | 微孔酶標(biāo)板 | 96孔 |
| 2 | 陰性對(duì)照 | 0.3mL |
| 3 | 陽性對(duì)照 | 0.3mL |
| 4 | 樣本稀釋液 | 6mL |
| 5 | 檢測抗體-HRP | 10mL |
| 6 | 20×洗滌緩沖液 | 25mL |
| 7 | 底物A | 6mL |
| 8 | 底物B | 6mL |
| 9 | 終止液 | 6mL |
| 10 | 封板膜 | 2張 |
| 11 | 說明書 | 1份 |
| 12 | 自封袋 | 1個(gè) |
| 13 | 微孔酶標(biāo)板 | 96孔 |
【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期6個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰性、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照50μl；樣品孔每孔加入待測樣本50μL，空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，靜置，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.甩去孔內(nèi)液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μL，蓋好蓋板膜，置37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，于450nm波長處測定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照≤0.2，陽性對(duì)照≥0.8。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.C.O（臨界值）=0.25+陰性對(duì)照孔均值。
2.陽性判斷（Cut-Off值）：陰性對(duì)照OD值+0.15，樣本OD值大于閾值，判定為陽性，反之，為陰性。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測血清或血漿中禽白血病病毒。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。
3.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，以防水滴凝聚在冷板條上。未用完酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
5.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果，在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
6.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈，消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
7.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
9.不同批號(hào)試劑組分不得混用。
