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外泌體相關(guān)技術(shù)服務(wù)平臺介紹
  外泌體(Exosome)是直徑約為 30-150nm，密度在 1.13-1.21g/ml 的小囊泡。Exosome 天 然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液和母乳，是活細(xì)胞分泌的來源于晚期核內(nèi)體(也稱 為多囊泡體 )的膜性囊泡。 研究發(fā)現(xiàn)，Exosome 內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì) rRNA 和 microRNA，并且 exosome 能夠通過生物屏障，在細(xì)胞間傳遞功能性核酸分子，從而發(fā)揮各種生物學(xué)功能。 一、外泌體分離提取服務(wù)： 本公司可提供差速超速離心法和試劑盒法分離外泌體?？煞蛛x細(xì)胞上清、血液、腦 脊液、肺泡灌洗液、尿液、膽汁、腹水、唾液、羊水以及動植物組織樣本來源的外泌體。2 種分離方法特點(diǎn)如下： 差速超速離心法：最*用的外泌體純化方法。差速超速離心法操作簡便，所獲得的囊泡 純度高、雜質(zhì)少。但所需樣品較多，產(chǎn)率低于試劑盒法。自有平臺，快速高效，隨時預(yù)約， 周期一般 1-3 個工作日。 試劑盒法：操作簡便，外泌體產(chǎn)率高，所需要的樣品體積較少。 低溫超速離心機(jī) Thermo WX100二、外泌體電鏡鑒定技術(shù)服務(wù)： 2.1、電鏡下，外泌體多為茶托形或一側(cè)凹陷的半球形。想要獲得比較好的電鏡數(shù)據(jù)， 除高質(zhì)量外泌體樣品外，按樣品摸索合適的上機(jī)條件后盡快制樣上機(jī)。自有的電鏡平臺，專 業(yè)提供外泌體電鏡鑒定技術(shù)服務(wù)。電鏡平臺搭載真實 2000 萬像素的 coms 相機(jī)，感光度更 高，照片清晰度大大超出常規(guī)電鏡。結(jié)合本公司 NTA 測試平臺，可以更好的把握樣品濃度 及上機(jī)條件。多年來，已經(jīng)拍攝過數(shù)千例各種來源的外泌體樣品。質(zhì)量及周期均可靠，受到 廣大客戶一*好評！ JEOL 品牌 JEM 1400 型透射電鏡2.2、外泌體免疫電鏡技術(shù)服務(wù) 在透射電鏡基礎(chǔ)上，對外泌體標(biāo)志蛋白進(jìn)行免疫標(biāo)記，利用膠體金標(biāo)記出外泌 體標(biāo)志蛋白的空間位置，結(jié)合了透射電鏡表征和免疫學(xué)原理。這樣數(shù)據(jù)結(jié)果既 可以獲得經(jīng)典形態(tài)的外泌體形態(tài)，又可以定性及定位外泌體表面的標(biāo)志蛋白。 可以作為文章的加分項！三、外泌體粒徑檢測技術(shù)服務(wù)： 平臺提供外泌體濃度及粒徑檢測技術(shù)服務(wù)，平臺采用德國 Particle Metrix 公司的 ZetaView 粒度儀，可對樣品進(jìn)行高質(zhì)高效檢測。 外泌體樣品有其特殊性，4℃下，會逐漸降解并失去生物活性。所以，我司 NTA 檢測平 臺嚴(yán)格要求檢測時間，到樣 1-2 個工作日出具檢測報告。確保準(zhǔn)確性及時效性。有特殊要求 的客戶可加急處理，最快當(dāng)天到樣，當(dāng)天檢測，當(dāng)天即可出具報告！ 德國 Particle Metrix 公司的 ZetaView 粒度儀 四、外泌體 WB 鑒定服務(wù)： 外泌體陽性指標(biāo)主要包括：CD9,CD63,CD81,TSG101，syntenin。陰性對照指標(biāo)為：Calnexin （內(nèi) 質(zhì)網(wǎng)蛋白）。常規(guī)選擇 2 個陽性和 1 個陰性指標(biāo)。公司提供上述指標(biāo)對應(yīng)一抗及二抗，特殊抗 體需由客戶自己提供。實際操作中，陽性蛋白分子量并不固定，以實際情況為準(zhǔn)。另外，外泌體  WB 檢測有其特殊性，部分指標(biāo)可能不出，或表達(dá)量很高。做出*美條帶可能需要反復(fù)調(diào)試濃度。 我們會保留對應(yīng)原始數(shù)據(jù)照片及轉(zhuǎn)膜圖片，不保證 WB 實驗成功，且需要按實際操作次數(shù)收費(fèi)。 五、外泌體檢測服務(wù)-QPCR 檢測 檢測范圍包括：mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA、DNA 等六、外泌體共孵育實驗 1、實驗介紹 外泌體與細(xì)胞共孵育培養(yǎng)時，細(xì)胞可以通過胞吞過程吞噬外泌體，外泌體包裹的核酸、蛋白質(zhì) 及其他分子會釋放出來，從而影響細(xì)胞的功能變化。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類 型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、腫瘤侵襲等方方面面。 2、實驗流程 外泌體提取和純化外泌體濃度測定 外泌體熒光標(biāo)記（PKH67/PKH26 染色） 熒光外泌體純化 熒光外泌體濃度標(biāo)記 外泌體-細(xì)胞共孵育培養(yǎng)實驗 細(xì)胞功能學(xué)檢測（周期、凋亡、克隆形成、侵襲、轉(zhuǎn)移等）細(xì)胞基因表達(dá)檢測（qPCR、Western  blot、Elisa 檢測等） 八、外泌體 MicroRNA 測序及蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù) 平臺有著多年的二代、三代測序 及蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)經(jīng)驗。相關(guān)的實驗平臺及服務(wù)經(jīng)驗豐富，團(tuán)隊技 術(shù)實力雄厚，合作開展相關(guān)業(yè)務(wù)。1、外泌體MicroRNA 測序 實驗內(nèi)容：外泌體提取、純化建庫+全轉(zhuǎn)錄組測序基礎(chǔ)數(shù)據(jù)分析 升級服務(wù)：高級數(shù)據(jù)分析 2、外泌體蛋白組學(xué)技術(shù)服務(wù) 實驗內(nèi)容：外泌體總蛋白提取，labelfree 非定量質(zhì)譜檢測蛋白組學(xué)； 升級服務(wù)：質(zhì)譜個性化分析