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一站式生物素檢測TUNEL試劑盒(DAB法)

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更新時間:2018-06-19 14:40:49瀏覽次數(shù):452次

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產(chǎn)品簡介

一站式生物素檢測TUNEL試劑盒(DAB法)TUNEL全稱末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的dUTP切口及末端標記(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling),它是一種高靈、敏度、快速檢測細胞凋亡的方法。其原理是在發(fā)生凋亡細胞中會有大量的具有切口的DNA片段、或具有游離3'-OH端、長度是180-200 bp倍數(shù)的DNA片段, TdT(Terminal Deoxynucleo

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一站式生物素檢測TUNEL試劑盒(DAB法)

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一站式生物素檢測TUNEL試劑盒(DAB法)

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980元

 

TUNEL全稱末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的dUTP切口及末端標記(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling),它是一種高靈、敏度、快速檢測細胞凋亡的方法。其原理是在發(fā)生凋亡細胞中會有大量的具有切口的DNA片段、或具有游離3'-OH端、長度是180-200 bp倍數(shù)的DNA片段, TdT(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶)可以以不依賴模板的方式進行標記,如參入熒光素、生物素或等標記的dUTP,而正常細胞DNA幾乎沒有游離的3'-OH和切口,所以通過對標記物的顯色反應和熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測就可以區(qū)分正常和凋亡的細胞。本試劑盒有如下特點:
1. 一站式,不需要額外準備專用的試劑(但客戶還是需要自備常規(guī)的試劑,如水、PBS和細胞涂片所需試劑)。
2. 高靈敏度,可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡,適合檢測早期的細胞凋亡。
3. 特異性高,只標記凋亡細胞,而不標記壞死細胞。
4. 快速,整個操作過程僅需1-2個小時即可完成。
5. 方便,一步染色反應,洗滌后即可觀察,不必使用二抗等進行多步操作。
6. 適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細胞樣本(細胞涂片)。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時,變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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