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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-06-15 13:36:23瀏覽次數(shù)：313次
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包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝用E.coli作為宿主表達得到的重組蛋白往往會形成包涵體，其中的重組蛋白質(zhì)只完成部分折疊，還沒形成后的正確空間結(jié)構(gòu)，所以沒有生物活性，要得到有活性的重組蛋白，還需要后續(xù)的溶解和復(fù)性（重折疊）處理。目前較常用的溶解包涵體的方法是用尿素，Sarkosyl，鹽酸胍等強變性劑，其缺點是包涵體中的重組蛋白質(zhì)被*變性，使后續(xù)的蛋白質(zhì)復(fù)性處理效率降低。本產(chǎn)品根據(jù)包涵體中的重組蛋白質(zhì)已
包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝 | 100次 | 1490元 |
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用E.coli作為宿主表達得到的重組蛋白往往會形成包涵體，其中的重組蛋白質(zhì)只完成部分折疊，還沒形成后的正確空間結(jié)構(gòu)，所以沒有生物活性，要得到有活性的重組蛋白，還需要后續(xù)的溶解和復(fù)性（重折疊）處理。目前常用的溶解包涵體的方法是用尿素，Sarkosyl，鹽酸胍等強變性劑，其缺點是包涵體中的重組蛋白質(zhì)被*變性，使后續(xù)的蛋白質(zhì)復(fù)性處理效率降低。本產(chǎn)品根據(jù)包涵體中的重組蛋白質(zhì)已經(jīng)完成了部分折疊這一實事設(shè)計，具有下列特點：
1. 一站式，提供包涵體洗滌、溶解和蛋白質(zhì)復(fù)性的所有試劑。
2. 采用溫和法溶解包涵體，釋放的包涵體蛋白質(zhì)不*變性，還能保持其部分折疊的結(jié)構(gòu)，使后續(xù)的復(fù)性處理效率提高。
3. 所用復(fù)性液基于稀釋復(fù)性，經(jīng)過精心優(yōu)化，有利于大部分蛋白的復(fù)性。
4. 還提供五種不同的添加劑，它們可以單獨加入復(fù)性液，也可以按一定比例進行自由組合，以適應(yīng)不同的蛋白質(zhì)折疊需求。
5. 本試劑盒提供實惠的小規(guī)格，用于做預(yù)實驗用，用戶如果選擇到合適的溶液組合后，可以單獨購買其中的溶液以用于大量制備。
6. 本試劑盒足夠100次小規(guī)模（1 mL規(guī)模）的蛋白質(zhì)復(fù)性實驗。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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