Rosetta（DE3）大腸桿菌

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更新時間：2018-06-14 15:34:09瀏覽次數(shù)：669次

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上海聯(lián)邁生物工程有限公司

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產(chǎn)品簡介

Rosetta（DE3）大腸桿菌Rosetta系列菌株來源于BL21系列宿主菌，該系列菌株含有原本在大腸桿菌中稀少的真核細胞密碼子，增加了真核細胞的蛋白表達水平。Rosetta（DE3）菌株含有pRARE質(zhì)粒，能夠提供AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA稀有密碼子的tRNA，該質(zhì)粒具有氯霉素抗性。Rosetta（DE3）通過提供稀有密碼子，使得該宿主菌相對于其他大腸桿菌，能夠

詳細介紹

Rosetta(DE3)大腸桿菌

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Rosetta(DE3)大腸桿菌	1 管	詢價

Rosetta系列菌株來源于BL21系列宿主菌，該系列菌株含有原本在大腸桿菌中稀少的真核細胞密碼子，增加了真核細胞的蛋白表達水平。Rosetta(DE3)菌株含有pRARE質(zhì)粒，能夠提供AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA稀有Rosetta(DE3)大腸桿菌密碼子的tRNA，該質(zhì)粒具有氯霉素抗性。Rosetta(DE3)通過提供稀有密碼子，使得該宿主菌相對于其他大腸桿菌，能夠提供更加“通用”的蛋白質(zhì)表達，從而提升目的蛋白表達水平。DE3是溶源性的 λDE3, 所以帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于pET系列載體及其他T7啟動子系列載體。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，Rosetta(DE3)大腸桿菌離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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