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DNA快速連接試劑盒

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

DNA快速連接試劑盒DNA連接反應(yīng)通過T4連接酶催化雙鏈DNA的3'-OH和5'-P形成磷酸二酯鍵而將DNA共價(jià)連接在一起。被連接的DNA末端可以是粘末端（例如限制性切割EcoRI產(chǎn)生的末端），也可以是平末端（限制性切割Sma I產(chǎn)生的末端）。Pheiffer 等人發(fā)現(xiàn)PEG可以促進(jìn)T4 DNA連接酶催化的連接反應(yīng)[NAR，11，7853-7871，1983]，連接反應(yīng)只需十分鐘即可完成。本產(chǎn)品就

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DNA快速連接試劑盒

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
DNA快速連接試劑盒	100次	490元

DNA連接反應(yīng)通過T4連接酶催化雙鏈DNA的3'-OH和5'-P形成磷酸二酯鍵而將DNA共價(jià)連接在一起。被連接的DNA末端可以是粘末端（例如限制性切割EcoRI產(chǎn)生的末端），也可以是平末端（限制性切割Sma I產(chǎn)生的末端）。Pheiffer 等人發(fā)現(xiàn)PEG可以促進(jìn)T4 DNA連接酶催化的連接反應(yīng)[NAR，11，7853-7871，1983]，連接反應(yīng)只需十分鐘即可完成。本產(chǎn)品就是根據(jù)這一原理設(shè)計(jì)，其特點(diǎn)如下：

1. 超快，整個(gè)連接反應(yīng)只需要室溫5分鐘左右，反應(yīng)液可以直接用于轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。

2. 高效，溶液配方經(jīng)過優(yōu)化，每μg插入DNA連接轉(zhuǎn)化得到的重組子可達(dá)107左右。

3. 既可用于平末端連接，也可用于粘末端連接，包括PCR產(chǎn)物與T載體的連接。

4. 簡(jiǎn)單，客戶只需要提供載體和插入片段即可。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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