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更新時(shí)間：2018-06-13 16:17:53瀏覽次數(shù)：311次
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克必隆G載體（零背景克隆載體）本產(chǎn)品是高效零背景通用（General）克隆載體，其無背景克隆原理是該載體攜帶一自基因，多克隆位點(diǎn)在該基因之中，自身環(huán)化的載體其自基因正常表達(dá)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞不能生長(zhǎng)。只有當(dāng)外源DNA插入片段打斷該自基因的正常編碼順序，轉(zhuǎn)化細(xì)胞才能生長(zhǎng)，所以后得到的轉(zhuǎn)化子幾乎都是含有插入片段的重組子。
克必隆G載體（零背景克隆載體）
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
克必隆G載體（零背景克隆載體） | 2ug | 詢價(jià) |
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本產(chǎn)品是高效零背景通用（General）克隆載體，其無背景克隆原理是該載體攜帶一自基因，多克隆位點(diǎn)在該基因之中，自身環(huán)化的載體其自基因正常表達(dá)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞不能生長(zhǎng)。只有當(dāng)外源DNA插入片段打斷該自基因的正常編碼順序，轉(zhuǎn)化細(xì)胞才能生長(zhǎng)，所以后得到的轉(zhuǎn)化子幾乎都是含有插入片段的重組子。
1. 零背景，陽性率一般為95%，不用藍(lán)/白篩選，尤其適合于構(gòu)建文庫用。
2. 適用于絕大部分常用的E.coli菌株，而市場(chǎng)上的同類產(chǎn)品一般都需要特殊的菌株作宿主。
3. 克隆步驟簡(jiǎn)化，可一小時(shí)內(nèi)即可完成。載體無需*酶切，無需去磷酸化，無需要純化片段。
4. 多拷貝復(fù)制起始位點(diǎn)（ori），便于大量制備質(zhì)粒。
5. 質(zhì)粒用量?jī)H為常規(guī)方法的1/5。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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