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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時(shí)間:2018-06-07 14:35:47瀏覽次數(shù):351次
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非凍型組織RNA保存液是一種在較高溫度下保存RNA樣品的非凍型無(wú)毒溶液,它能迅速滲入細(xì)胞內(nèi),通過(guò)高效抑制RNase的活性而保存RNA的完整性。其主要特點(diǎn)是:
1. 非凍保存提取RNA用的新鮮組織,在37℃下可保存1天,25℃下可保存1周,4℃下可保存1月,在-20℃或-80℃下可長(zhǎng)期保存。其間樣品可反復(fù)凍融十多次。
非凍型組織RNA保存液
名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
非凍型組織RNA保存液 | 250 mL | 790元 |
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RNALOCKER是一種在較高溫度下保存RNA樣品的非凍型無(wú)毒溶液,它能迅速滲入細(xì)胞內(nèi),通過(guò)高效抑制RNase的活性而保存RNA的完整性。其主要特點(diǎn)是:
1. 非凍保存提取RNA用的新鮮組織,在37℃下可保存1天,25℃下可保存1周,4℃下可保存1月,在-20℃或-80℃下可長(zhǎng)期保存。其間樣品可反復(fù)凍融十多次。
2. 用范圍廣,可用于保存、郵寄和運(yùn)輸病毒、細(xì)菌、果蠅、植物組織、動(dòng)物組織、培養(yǎng)細(xì)胞、懸浮細(xì)胞(白細(xì)胞、流式細(xì)胞儀收集的細(xì)胞)等。
3. 兼容性廣,RNALOCKER保存的樣品可以直接用于RNA提取,也可直接用于組織切片、免疫學(xué)和流式細(xì)胞分析。
4. 結(jié)果準(zhǔn)確,本產(chǎn)品進(jìn)入細(xì)胞后能迅速鎖定RNA水平,使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更能準(zhǔn)確反映取樣時(shí)基因表達(dá)譜的真實(shí)狀態(tài)。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過(guò)離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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