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更新時(shí)間：2018-05-25 14:55:41瀏覽次數(shù)：573次
聯(lián)系我時(shí)，請(qǐng)告知來自 環(huán)保在線HBVP人腦血管周細(xì)胞（STR鑒定）
HBVP人腦血管周細(xì)胞（STR鑒定）
英文名稱：
規(guī)格：1*10 6
細(xì)胞介紹
一、細(xì)胞特性
二、細(xì)胞收到后處理
HBVP人腦血管周細(xì)胞（STR鑒定）在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細(xì)胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
（1）細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
★ 注：如運(yùn)輸過程中導(dǎo)致細(xì)胞污染或者死亡，我們將無條件補(bǔ)發(fā) 收貨后十個(gè)工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價(jià)重發(fā)。
相關(guān)細(xì)胞系列表：
OP9小鼠干細(xì)胞（骨髓基質(zhì)來源）OP9（干細(xì)胞庫(kù)保藏） 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
PC-12*培養(yǎng)液大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞PC-12*培養(yǎng)液，590ml/瓶 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
OP9 *培養(yǎng)液小鼠胚胎干細(xì)胞OP9*培養(yǎng)液，625ml/瓶 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
【暫不供應(yīng)】hiPS無飼養(yǎng)層*培養(yǎng)液（美國(guó)進(jìn)口）500ml/瓶用于培養(yǎng)人誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞hiPS（DYR0100、DYP0530）。 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
DMEM*培養(yǎng)液，550ml/瓶適用于培養(yǎng)Cal62,P815,PANC-1,Hepa 1-6,C2C12,A-375,Cos-7,Caov-3,Huh-7,STO,293T 等細(xì)胞 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
hiPS無飼養(yǎng)層消化液(dissociation reagent) （美國(guó)進(jìn)口）40ml/管用于培養(yǎng)人誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞hiPS（DYR0100、DYP0530）。 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
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