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NR8383大鼠肺泡巨噬細(xì)胞（STR鑒定）

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NR8383大鼠肺泡巨噬細(xì)胞（STR鑒定）NR8383 （正常大鼠，1983年）來(lái)源于肺灌洗時(shí)的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個(gè)月。隨后，不再需要外源生長(zhǎng)因子。通過(guò)有限稀釋法從單個(gè)細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，
英文名稱：Rat Alveolar Macrophages Cell

詳細(xì)介紹

NR8383大鼠肺泡巨噬細(xì)胞（STR鑒定）
英文名稱：Rat Alveolar Macrophages Cell
規(guī)格：1*10 ⁶
細(xì)胞介紹
NR8383 (正常大鼠，1983年)來(lái)源于肺灌洗時(shí)的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個(gè)月。隨后，不再需要外源生長(zhǎng)因子。通過(guò)有限稀釋法從單個(gè)細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，F(xiàn)c受體，氧化降解；分泌IL-1, TGF-β和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長(zhǎng)因子。NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGF-β前體。在博萊霉素刺激下，TGF –β mRNA表達(dá)也上升。細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素敏感。1-10 鈉克/毫升的LPS水平抑制增生達(dá)50%。即使達(dá)到0.001毫克/毫升的水平，LPS抑制還是無(wú)毒且在后續(xù)過(guò)程中可逆的。NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來(lái)源，可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性。
一、細(xì)胞特性
1）來(lái)源：肺；巨噬細(xì)胞
2）形態(tài)：巨噬細(xì)胞，半懸浮生長(zhǎng)
3）含量：>1x106 個(gè)/mL
4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、細(xì)胞收到后處理
NR8383大鼠肺泡巨噬細(xì)胞（STR鑒定）在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細(xì)胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問(wèn)題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
（1）細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；