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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-05-24 13:58:45瀏覽次數：317次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線NCI-H295R人腎上腺皮質腺癌細胞（STR鑒定）該細胞系源于多能腎上腺皮質癌細胞系NCI-H295，后者由Gazdar AF等建立，從腎上腺皮質的腫瘤中分離而來。NCI-H295細胞經改變培養(yǎng)條件獲得了NCI-295R細胞，群體倍增時間從原來的5天減為2天。NCI-295細胞懸浮生長，而NCI-H
英文名稱：Human Adrenal Cortical Adenocarcinoma Cells
NCI-H295R人腎上腺皮質腺癌細胞（STR鑒定）
英文名稱：Human Adrenal Cortical Adenocarcinoma Cells
規(guī)格：1*10 6
細胞介紹
該細胞系源于多能腎上腺皮質癌細胞系NCI-H295，后者由Gazdar AF等建立，從腎上腺皮質的腫瘤中分離而來。NCI-H295細胞經改變培養(yǎng)條件獲得了NCI-295R細胞，群體倍增時間從原來的5天減為2天。NCI-295細胞懸浮生長，而NCI-H295R呈單層貼壁生長。NCI-H295R細胞保留了產生雄激素的能力，對血管緊張素Ⅱ和鉀離子有反應。
一、細胞特性
1） 來源：腎上腺
2） 形態(tài)：上皮細胞樣
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
二、細胞收到后處理
NCI-H295R人腎上腺皮質腺癌細胞（STR鑒定）在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
三、細胞培養(yǎng)步驟
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？
（1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
★ 注：如運輸過程中導致細胞污染或者死亡，我們將無條件補發(fā) 收貨后十個工作日內有其他問題提供照片可半價重發(fā)。
相關細胞系列表：
甲磺酸伊馬替尼耐藥的胃腸道間質瘤細胞系；GIST-1114 1×10^6 細胞數/ml
雜交瘤細胞株；9G2.5 1×10^6 細胞數/ml
Cas9穩(wěn)定表達的人子宮內膜腺癌細胞；HEC-1-B-Cas9-589 人源 1×10^6 細胞數/ml
Imatinib耐藥的胃腸道間質瘤細胞系；GIST-1210 1×10^6 細胞數/ml
雜交瘤細胞株；H1A2 1×10^6 細胞數/ml
人抗CD19嵌合抗原受體T細胞株；CAR19-T-PL 人源 1×10^6 細胞數/ml
雜交瘤細胞株；2F2 1×10^6 細胞數/ml
雜交瘤細胞株；F3A2 1×10^6 細胞數/ml
雜交瘤細胞株；4G1 1×10^6 細胞數/ml
雜交瘤細胞株；CH3 1×10^6 細胞數/ml
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