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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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人源細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基質(zhì)效應(yīng)
2018-9-18 閱讀(373)
人源細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分，由于基質(zhì)成分會(huì)對(duì)分析過程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱為基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effects）。這是免疫檢測(cè)方法開發(fā)和使用中需要避開的大坑。
基質(zhì)效應(yīng)的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，但不用擔(dān)心，有兩種簡(jiǎn)單的方法可以用來評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)。
1. 線性稀釋：
一般來講，抗原和捕獲/檢測(cè)抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會(huì)逐步減少，測(cè)量值也更接近真實(shí)值。沒有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，無論如何稀釋，測(cè)量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，稀釋會(huì)造成非特異性結(jié)合比例的減少，測(cè)量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變?；|(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果有假陰性和假陽性兩種，在線性稀釋時(shí)就可以辨別出來。不同品牌的ELISA 試劑盒表現(xiàn)差距非常大。
2. 摻入/回收率實(shí)驗(yàn)（Spike/Recovery Assay）
基質(zhì)效應(yīng)還可以通過分析物的摻入/回收率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測(cè)定過濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測(cè)到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)。回收率介于80-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。
基質(zhì)效應(yīng)可以通過產(chǎn)品階段的優(yōu)化盡可能去消除的。所以為什么一定要使用試劑盒配套的稀釋液？不合適的樣本稀釋液很多時(shí)候會(huì)加大基質(zhì)效應(yīng)，影響免疫反應(yīng)體系，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差加大。在ELISA試劑盒領(lǐng)域，WKSUBIO系列的試劑盒是高品質(zhì)的試劑盒。
