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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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上皮細(xì)胞株體制備方法步驟
2018-4-16 閱讀(896)
上皮細(xì)胞株體制備方法步驟
(1)秋水仙素處理:取骨髓前3h先給小鼠腹腔注入秋水仙素,注射劑量為100μg/kg動(dòng)物體重。
(2)取骨髓:用損傷脊髓法處死小鼠,然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉,取出大腿骨,用一小塊紗布搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關(guān)節(jié)頭,然后用注射器吸取5ml 0.85%生理鹽水,插入股骨一端,將骨髓細(xì)胞沖洗至10ml的離心管中??芍貜?fù)沖洗多次,直至骨髓腔呈白色為止。
(3)低滲處理:將所獲得的細(xì)胞懸浮液以 1000rpm離心10min,吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加0.075mol/L KCL 溶液(37℃)至8ml刻度,將細(xì)胞沉淀物吹散打勻,在37℃水浴低滲25min。
(4)固定:低滲處理后,立即加入1ml新配制且預(yù)冷的固定液,抽打均勻,然后1000 rpm離心10min,棄上清。沿管壁加固定液至6ml, 吹散細(xì)胞后靜止固定10min,即*次固定。按上述條件離心,去上清液,再次加入固定液至6ml,進(jìn)行第二次固定。10min后離心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液,沖勻制成細(xì)胞懸液。
(5)滴片:取事先在冰箱中預(yù)冷的載玻片,從約15cm高處向每個(gè)載玻片上滴1~2滴細(xì)胞懸液于粘有冰水的載玻片上,晾干。
(6)染色:取制片平放在玻璃板上,用1∶9 Giemsa染液染色20min,流水沖洗后晾干。
(7)觀察:小白鼠染色體的形態(tài)特征,并計(jì)算2n的染色體數(shù)目。
上皮細(xì)胞株5 x 10^5 cells/vial 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 RA
5 x 10^5 cells/vial 大鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞 RA-c
5 x 10^5 cells/vial 大鼠海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞 RA-h
5 x 10^5 cells/vial 大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 RM
5 x 10^5 cells/vial 大鼠淋巴成纖維細(xì)胞 RLF
5 x 10^5 cells/vial 大鼠肺泡上皮細(xì)胞 RPAEpiC
5 x 10^5 cells/vial 大鼠腎小管上皮細(xì)胞 RRTEpiC
5 x 10^5 cells/vial 大鼠肝星形細(xì)胞 RHSteC
1 x 10^6 cells/vial 大鼠心肌細(xì)胞 RCM
5 x 10^5 cells/vial 大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞-骨髓 RMSC
5 x 10^5 cells/vial 小鼠垂體細(xì)胞 MPC
5 x 10^5 cells/vial 小鼠腦膜細(xì)胞 MMenC
1 x 10^6 cells/vial 小鼠腦脊神經(jīng)元 MN-r
1 x 10^6 cells/vial 小鼠黑質(zhì)神經(jīng)元 MN-sn
1 x 10^6 cells/vial 小鼠紋狀體神經(jīng)元 MN-s
1 x 10^6 cells/vial 小鼠海馬趾神經(jīng)元 MN-h
1 x 10^6 cells/vial 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 MN-c
1 x 10^6 cells/vial 小鼠顆粒細(xì)胞 MGC
1 x 10^6 cells/vial 小鼠腹脊髓神經(jīng)元 MN-vsc
1 x 10^6 cells/vial 小鼠背脊髓神經(jīng)元 MN-dsc
5 x 10^5 cells/vial 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 MOPC
5 x 10^5 cells/vial 小鼠雪旺細(xì)胞 MSC
5 x 10^5 cells/vial 小鼠周神經(jīng)成纖維細(xì)胞 MPNF
5 x 10^5 cells/vial 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 MA
5 x 10^5 cells/vial 小鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞 MA-c
5 x 10^5 cells/vial 小鼠海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞 MA-h
5 x 10^5 cells/vial 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 MM
1 x 10^6 cells/vial 小鼠巨噬細(xì)胞 MMa
5 x 10^5 cells/vial 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞 MLF
5 x 10^5 cells/vial 小鼠腎小管上皮細(xì)胞 MREpiC上皮細(xì)胞株