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上海邦景實業(yè)有限公司
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細胞分裝與凍存
2025-6-16 閱讀(5)
細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活體開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。
細胞分裝與凍存：
1.將重懸后的細胞懸液分裝至標記好的凍存管中，每管分裝的細胞懸液體積一般為 1 - 1.5 ml。在分裝過程中，要注意避免產(chǎn)生氣泡，同時確保凍存管密封良好。
2.由于使用的凍存方式不同會有不同的凍存方法，請選擇合適的凍存步驟。
a. 使用傳統(tǒng)方法：將凍存管先放入 4℃冰箱中靜置60 分鐘，使細胞逐漸適應(yīng)低溫環(huán)境。然后將凍存管轉(zhuǎn)移至 -20℃冰箱中放置2小時，接著再放入-80℃冰箱過夜。最后，將凍存管迅速轉(zhuǎn)移至液氮罐中進行長期保存。在轉(zhuǎn)移過程中，要盡量縮短凍存管在室溫及 -20℃以上環(huán)境中的停留時間，防止細胞受損。
b. 使用凍存盒：將凍存管放入4℃預(yù)冷的凍存盒（確保凍存盒已加滿或更新異丙醇）中，然后快速將凍存管轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜。最后，將凍存管迅速轉(zhuǎn)移至液氮罐中進行長期保存。在轉(zhuǎn)移過程中，要盡量縮短凍存管在室溫及 -20℃以上環(huán)境中的停留時間，防止細胞受損。
c. 使用細胞凍存液：將凍存管轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜，然后將凍存管迅速轉(zhuǎn)移至液氮罐中進行長期保存。在轉(zhuǎn)移過程中，要盡量縮短凍存管在室溫及 -20℃以上環(huán)境中的停留時間，防止細胞受損。
