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上海邦景實業(yè)有限公司
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細胞轉染實驗一般過程步驟
2023-12-4 閱讀(186)
轉染，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。應用在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產(chǎn)等生物學試驗中。
細胞轉染實驗一般過程步驟:
1. 轉染試劑的準備
① 將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質體 體積:DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。
3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。
4. 吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。
5. 加入混合液，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。
6. 到時后，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液，之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時。
