德國(guó)Merck進(jìn)口卡爾費(fèi)休試劑1.09255.0500
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更新時(shí)間：2017-12-02 15:13:02瀏覽次數(shù)：258次
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Blood Taq DNA聚合酶（免提?。?br />D1010L1179
200 tests
-20℃
550
D1010L1179
1000 tests
-20℃
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產(chǎn)品描述
Blood Taq DNA 聚合酶來(lái)源于攜帶有突變的 Taq DNA 聚合酶
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產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 保存 | 價(jià)格(元) |
Blood Taq DNA聚合酶（免提取） | D1010L1179 | 200 tests | -20℃ | 550 |
Blood Taq DNA聚合酶（免提?。?/span> | D1010L1179 | 1000 tests | -20℃ | 2450 |
產(chǎn)品描述
Blood Taq DNA 聚合酶來(lái)源于攜帶有突變的 Taq DNA 聚合酶基因的 E. coli 菌株，是截短后的 Taq DNA 聚合酶，缺失了 N 端的 5′結(jié)構(gòu)特異性核酸內(nèi)切酶結(jié)構(gòu)域，缺失了 N 端的 280 個(gè)氨基酸；此外其基因內(nèi)部發(fā)生了三個(gè)點(diǎn)突變。這些突變使它能夠耐受全血中存在的抑制劑, Blood Taq DNA 聚合酶其他性能與常規(guī) Taq DNA 聚合酶沒(méi)有較大差異。此酶能夠擴(kuò)增人和小鼠全血樣品中的 DNA 而無(wú)需事先提純。Blood Taq DNA 聚合酶在 25 μL 反應(yīng)體系中能夠耐受高達(dá) 20%的全血（50 μL 反應(yīng)體系中耐受 30%）。
Blood Taq DNA 聚合酶較其他同類產(chǎn)品單位活性高，單位反應(yīng)成本低。
使用 Blood Taq DNA 聚合酶擴(kuò)增人全血。1:5%血液+Na-EDTA；2:5%血液+K-EDTA；3:5%血液+ Na-肝素；4:5%血液+Na-檸檬酸；5:含有人干血的 1mm2 FTA GutherieCard；6:含有人干血的 1mm2 FTA Card（50 μL 水洗）。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。收到貨后-20℃避光干燥保存，1年有效。
使用方法
1. 反應(yīng)體系配制。各組分在冰上*融化、混勻，按照下表進(jìn)行加樣:
組分 | 25 μL | 50 μL | 終濃度 | |
5X Bloot Taq Reaction Buffer | 5 μL | 10 μL | 1X | |
10 mM dNTP | 0.5 μL | 1 μL | 0.2 mM | |
10 | μM Forward Primer | 0.75 μL | 1.5 μL | 0.3 μM (0.05-1 μM) |
10 | μM Reverse Primer | 0.75 μL | 1.5 μL | 0.3 μM (0.05-1 μM) |
Whole Blood | up to 2.5 μL* | up to 10 μL** | ||
Blood Taq DNA | 2 μL | 4 μL | ||
Nuclease-free H2O | to 25 μL | 50 μL | ||
* ≤10% Recommended in 25 μL reaction volume. ** ≤=20% Recommended in 50 μL reaction volume.
1. 加血液樣品。先將其它組分用移液器上下混勻，然后將血液加在管子底部。
2. 將 PCR 管轉(zhuǎn)移至 95°C 預(yù)熱的 PCR 儀，開(kāi)始循環(huán)。
注：若反應(yīng)體系中包含>10%的血液，*用 50 μL 反應(yīng)體系。 4. PCR 反應(yīng)。* PCR 程序：通常為 30-40 個(gè)循環(huán)：
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
Initial Denaturation | 95°C | 3 minutes |
30-40 Cycles (Typically 35) | 95°C | 20 seconds |
50-68°C | 30 seconds | |
68°C | 2minutes per kb | |
Final Extension | 68°C | 10 minutes |
Hold | 4-10°C | |
注意事項(xiàng)
1. DNA 模板: 全血樣品*用*、Na-EDTA、K-EDTA 或者檸檬酸鈉處理，雖然 Blood Taq DNA 聚合酶可以耐受 30% （v/v）的全血樣品，但為了達(dá)到擴(kuò)增效果,5%–10%為建議的理想樣品量。干血如果存放在 Guthrie 卡或者 903 卡上(Whatman, NJ)，可以直接在 25μL 反應(yīng)體系內(nèi)加入 1mm punch disc。如果血液存放在 FTA paper (Whatman, NJ), 則先把 1mm punch disc
在 50μL dH2O 中,50°C 條件下孵育 5 分鐘，然后棄去 50μL dH2O，把 disc 直接放入 25 或 50μL PCR 反應(yīng)體系中。
2. 引物：理想引物長(zhǎng)度在 20–30 個(gè)核苷酸，GC 含量 40–60%?？捎糜?jì)算機(jī)軟件輔助進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，諸如 PrimerSelect™ (DNAStar Inc, Madison, MI)或者 Primer3 等軟件在引物設(shè)計(jì)和分析時(shí)均表現(xiàn)良好。每個(gè)引物在反應(yīng)體系中的終濃度為 0.05–1μM, 0.3μM 時(shí)表現(xiàn)更佳。
3. dNTPs: 每種 dNTP *濃度為 200 μM。
4. 冷敏感: Blood Taq DNA 聚合酶增加了冷敏感性，包含部分熱啟動(dòng)酶（Hot Start Taq）的特點(diǎn)，將反應(yīng)體系至于冰上操作，并迅速置于 95°C 預(yù)熱的 PCR 儀可以將非特異性擴(kuò)增降至zui低。
5. 變性溫度和時(shí)間: 在正式開(kāi)始 PCR 循環(huán)前，*行 95°C，3 分鐘的預(yù)變性，可以確保血細(xì)胞得到充分裂解并釋放出 DNA
模板。
6. 退火溫度和時(shí)間: *退火時(shí)間持續(xù) 30 秒到 1 分鐘，退火溫度可以通過(guò)梯度 PCR 進(jìn)行優(yōu)化。梯度 PCR 時(shí)，退火起始溫度低于計(jì)算出 melting temperature (Tm)5°C。
7. 延伸時(shí)間: *延伸溫度為 68°C，zui后的延伸程序*為 10 分鐘，68°C。Blood Taq DNA 聚合酶延伸速度為 500bp/min.
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