EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染液（23966），是新一代的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形
成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進入細(xì)胞。除了具有陽離子脂質(zhì)體（如：
Lipo2000,3000）的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡單，適用范圍廣，重復(fù)性好等特點外，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低等特點。

詳細(xì)介紹

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染液（23966）使用方法
1. 接種細(xì)胞：用膠原酶消化細(xì)胞并計數(shù)（不建議用*）。轉(zhuǎn)染前 18-24 小時進行細(xì)胞的鋪板，以便在轉(zhuǎn)染時，貼壁細(xì)胞的密度
大約在 80%左右。注：培養(yǎng)液中的血清和抗生素不影響轉(zhuǎn)染效率。
2. 準(zhǔn)備 EZ Trans-DNA 復(fù)合物
  1）轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫 10 分鐘。下面，以轉(zhuǎn)染 24 孔板培養(yǎng)皿為例，說明轉(zhuǎn)染的具體方法（如果在別的培養(yǎng)器皿中進行轉(zhuǎn)染，各試劑建議使用量見表 1.：
  2）將 1 μg 質(zhì)粒 DNA 稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基，用移液槍吹吸 3-4 次。
  3）將 3 μL EZ Trans 轉(zhuǎn)染試劑稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基，用移液槍吹吸 3-4 次。
  注：無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基是稀釋液，不能使用含血清的培養(yǎng)基（包括 Opti-MEM）進行 DNA 和 EZ Trans 轉(zhuǎn)染試劑的稀釋！因為 EZ Trans-DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。
  4）將稀釋好的 EZ Trans 轉(zhuǎn)染試劑一次性全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒 DNA 中，立即用移液槍吹吸 3-4 次。
  注：此混合的順序不能反向進行！
  5）室溫放置 10-15 分鐘，以形成 EZ Trans-DNA 復(fù)合物。

表1：不同培養(yǎng)體積對應(yīng)的待轉(zhuǎn)DNA、EZ Trans、稀釋液用量

培養(yǎng)器皿	培養(yǎng)液體積（mL）	DNA量（μg）	EZ Trans (μL)	稀釋劑(μL)
48孔板	0.3	0.5	1.5	2 × 25
24孔板	0.5	1	3	2 × 40
12孔板	0.75	1.5	4.5	2 × 60
6孔板	1	3	9	2 × 125
35 mm培養(yǎng)皿	1	3	9	2 × 125
60 mm 培養(yǎng)皿	3	6	18	2 × 250
100 mm 培養(yǎng)皿	9	12	36	2 × 500

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞
1）將上述 80 μL EZ Trans-DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微渦旋，讓 EZ Trans-DNA
復(fù)合物分散均勻。
2）在 CO₂ 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后 12-18 小時，去除含 EZ Trans-DNA 復(fù)合物的培養(yǎng)液。（若細(xì)胞形態(tài)欠佳，可
在轉(zhuǎn)染 3-5h 后，添加 1/2 體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基，在轉(zhuǎn)染 12-18 小時后*去除含 EZ Trans-DNA 復(fù)合物的培養(yǎng)液，
用含血清和抗生素的新鮮培養(yǎng)液。）
3）轉(zhuǎn)染后zui快 7h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達，可根據(jù)需要在 24-48 小時內(nèi)檢測轉(zhuǎn)染效率。
注：篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，可在上述操作后（轉(zhuǎn)染細(xì)胞 24 小時后），將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋 10 倍以
上），在 CO₂培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下，約 1～2 周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染液（23966）運輸與保存方法

常溫運輸，4℃保存，保質(zhì)期12個月。

使用注意事項

質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)毒素質(zhì)粒。通過 260 nm 光吸收測定 DNA 濃度，260nm / 280nm 比值確定 DNA
純度（比值應(yīng)該在 1.8～2.0 的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。
細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮
凍存細(xì)胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用 GIBCO 或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞。

特別提醒

1. 對于某些類型的細(xì)胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。
如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為 70～80%。
2. 對于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。
3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI 復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是 DNA-PEI 復(fù)合物必須在無蛋白存在的條
件下形成。
4. 對大多數(shù)細(xì)胞來而言，每 1μg DNA 使用 3.0 μL EZ Trans 試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每 1 μg DNA 使用
1～4μL 體積線性 PEI 轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。

關(guān)鍵詞：移液槍培養(yǎng)箱

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