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一步法在臨床檢驗中的作用

閱讀:277發(fā)布時間:2018-2-27

在臨床檢驗中,此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如 HBsAg 、HBeAg、AFP、hCG 等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。

如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。

這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,作一步檢測。

     在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合,而不再形成  "夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現(xiàn)象,此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測讀,所得結(jié)果將低于實際的含量,這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中 HBsAg 、AFP 和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。

    假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg 的a 決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結(jié)合物。但在  HBsAg  的檢測中應注意亞型問題,HBs Ag有adr、adw、ayr 、ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的 a決定簇的反應性,這也是用單抗作夾心法應注意的問題。


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