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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細(xì)胞的訂購(gòu)信息：

英文簡(jiǎn)稱(chēng)：SCaBER細(xì)胞    

產(chǎn)品名稱(chēng)：鱗狀膀胱癌細(xì)胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：上皮細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：

培養(yǎng)條件：Minimum essential medium (Eagle) with 2 mM L-glutamine and Earle's BSS adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 0.1 mM non-essential amino acids, and 1.0 mM sodium pyruvate, 90%; fetal bovine serum, 10%

傳代方法：1:CQ-1:6傳代，2-3天換液1次。

貨號(hào)：CS-X64000

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀(guān)察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀(guān)察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：
（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞在對(duì)數(shù)生，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過(guò)度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很?chē)?yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大?。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
組蛋白H2A(H2A)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：H2A ELISA Kit轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白BACH2抗體包裝5g

組胺H4受體(HRH4)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：HRH4 ELISA Kit炭疽桿菌致死因子LF抗體包裝10mg

豐富糖蛋白(HRG)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：HRG ELISA Kit蛋白BOC抗體包裝250mg

阻抑素(PHB)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：PHB ELISA Kit氨肽酶A抗體包裝1g

足盂蛋白(PCX)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：PCX ELISA Kit腦鈉素/利鈉肽抗體包裝5g

棕櫚?；さ鞍?/span>6(MPP6)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MPP6 ELISA KitBcl2 beta蛋白抗體包裝1g

自身調(diào)節(jié)因子(AIRE)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：AIRE ELISA Kit骨涎蛋白抗體包裝25g

轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(TNPO1)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：TNPO1 ELISA Kit死亡調(diào)解子抗體包裝5g

轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：TFR2 ELISA KitApollon凋亡抑制蛋白抗體包裝1ml

轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：TRF ELISA Kit表面趨化因子受體6抗體包裝5ml

轉(zhuǎn)錄因子20(TCF20)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：TCF20 ELISA Kitβ-內(nèi)啡肽/β endorphin抗體包裝1g

轉(zhuǎn)錄激活因子6(ATF6)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：ATF6 ELISA Kit骨成型蛋白受體1A抗體包裝25g

轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：ATF5 ELISA KitBcl-xL蛋白抗體包裝5g

轉(zhuǎn)錄激活因子3(ATF3)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：ATF3 ELISA Kit磷酸化Bcl-xL(Ser62)抗體包裝100ml

轉(zhuǎn)狀腺素蛋白(TTR)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：TTR ELISA Kit相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗體包裝500ml
SCaBER細(xì)胞脂肪酸合成酶(FASN)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：FASN ELISA KitASTE1蛋白抗體包裝25g

脂多糖/內(nèi)(LPS)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：LPS ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體包裝500g

脂蛋白脂酶(LPL)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：LPL ELISA Kit微絲相關(guān)蛋白1抗體包裝5g

脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp-PL-A2)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：Lp-PL-A2 ELISA Kit腺苷A1A受體抗體包裝5g

脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp-PLA2)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：Lp-PLA2 ELISA Kit芳基硫酸酯酶B抗體包裝25g

脂蛋白α(Lp-α)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：Lp-α ELISA Kitγ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體包裝5g

正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：RANTES/CCL5 ELISA Kit共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體包裝1g

整合素αM(Itgam/CD11b)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：Itgam/CD11b ELISA Kit腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶包裝1g

整合素α-IIb(Itga2b/CD41)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：Itga2b/CD41 ELISA Kit芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體包裝250mg

整合素α5(Itgax/CD11c)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：Itgax/CD11c ELISA KitAlkB同源蛋白8抗體包裝25g

長(zhǎng)停滯特異性基因產(chǎn)物6(gas-6)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：gas-6 ELISA KitABI基因家族成員3結(jié)合蛋白抗體包裝5g

粘蛋白/粘液素7(MUC7)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MUC7 ELISA KitRho GTP酶激活蛋白20抗體包裝250mg

粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MUC5B ELISA Kit含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族10抗體包裝500g

粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MUC5AC ELISA Kit乙脫氫酶1蛋白家族L1抗體包裝25g

粘蛋白/粘液素2(MUC2)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MUC2 ELISA Kit軸抑制蛋白2抗體包裝5g