背景介紹：Cardioactive peptide (CCAP) is a cardioregulatory neurohormone that increases heart beat rate during adult wing inflation. This protein has no effect on beat amplitude. The effect of cardioactive peptide is both ino- and conotrophic. Cardioactive peptide has tissue specificity within the central nervous system and most neurons exhibit coexpression with burs.

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中文名稱(chēng)：心動(dòng)加速蛋白多肽抗體

英文名稱(chēng)：Anti-CCAP antibody

心動(dòng)加速蛋白多肽抗體，Anti-CCAP抗體-Western-blotting試驗(yàn)方法：

蛋白提樣品制備
1、 將培養(yǎng)液吸入至15 ml離心管中，于2500 rpm離心5 min。 
2、 棄上清，加入5 ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌，然后2500 rpm離心5 min。棄上清后用PBS重復(fù)洗滌一次。 
3、 用槍吸干上清后，加100 μl裂解液（含PMSF）冰上裂解30 min，裂解過(guò)程中要經(jīng)常彈一彈以使細(xì)胞充分裂解。 
4、將裂解液4℃、12000 rpm離心5 min，取上清分裝于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法測(cè)蛋白濃度
SDS－PAGE電泳 
1、 玻璃板對(duì)齊后放入夾中卡緊，然后垂直卡在架子上準(zhǔn)備灌膠。 
2、按前面方法配10％分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時(shí)，可用10 ml槍吸取5 ml膠沿玻璃放出，待膠面升到綠帶中間線(xiàn)高度時(shí)即可。然后膠上加一層水，液封后的膠凝的更快。（灌膠時(shí)開(kāi)始可快一些，膠面快到所需高度時(shí)要放慢速度。操作時(shí)膠一定要沿玻璃板流下，這樣膠中才不會(huì)有氣泡。加水液封時(shí)要慢，否則膠會(huì)被沖變型。） 
3、 當(dāng)水和膠之間有一條折射線(xiàn)時(shí)，說(shuō)明膠已凝了。再等3 min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。 
4、 按方法配4％的濃縮膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿(mǎn)濃縮膠后將梳子插入孔槽。灌膠時(shí)也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產(chǎn)生。插梳子時(shí)要使梳子保持水平。待到濃縮膠凝固后，兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出。 
5、 用水沖洗濃縮膠，將其放入電泳槽中。 
6、 測(cè)完蛋白含量后，計(jì)算含20-50 μg蛋白（根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇，沒(méi)有固定的量）的溶液體積即為上樣量。取出上樣樣品至200 μl的EP管中，加入5×SDS 上樣緩沖液至終濃度為1×。上樣前要將樣品于沸水中煮5-10 min使蛋白變性。
7、 加入足夠的電泳緩沖液后開(kāi)始準(zhǔn)備上樣。（電泳液至少要漫過(guò)內(nèi)測(cè)的小玻璃板。）用微量進(jìn)樣器貼壁吸取樣品，將樣品吸出不要吸進(jìn)氣泡。將加樣器針頭插至加樣孔中緩慢加入樣品（包括一孔做可視的蛋白marker）。（加樣太快可使樣品沖出加樣孔，若有氣泡也可能使樣品溢出。加入下一個(gè)樣品時(shí)，進(jìn)樣器需在外槽電泳緩沖液中洗滌數(shù)次，以免交叉污染） 
8、電泳：濃縮膠時(shí)用80-100 V跑，到分離膠以后用150-200 V跑，總時(shí)間2 h左右，電泳至溴酚蘭剛跑出即可終止電泳，進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。

規(guī)格：0.1ml/0.2m

濃度：1mg/1ml

抗體來(lái)源：本公司抗體有兔來(lái)源和鼠來(lái)源等

克隆類(lèi)型：兔來(lái)源為多抗，鼠來(lái)源為單抗

產(chǎn)品類(lèi)型：一抗

心動(dòng)加速蛋白多肽抗體，Anti-CCAP抗體簡(jiǎn)單介紹：

別 名：Cardioacceleratory peptide 2a; CCAP; CG4910; Crustacean cardioactive peptide; DmCCAP; CCAP_DROME.

此產(chǎn)品本公司有標(biāo)記的一抗出售，相關(guān)標(biāo)記有：Alexa Fluor 350 標(biāo)記、Alexa Fluor 488 標(biāo)記、Alexa Fluor 555 標(biāo)記、Alexa Fluor 647 標(biāo)記、AP標(biāo)記、APC標(biāo)記、Biotin標(biāo)記、Cy3標(biāo)記、Cy5標(biāo)記、Cy5.5標(biāo)記、Cy7標(biāo)記、FITC標(biāo)記、Gold標(biāo)記、HRP標(biāo)記、PE標(biāo)記、PE-Cy3標(biāo)記、PE-CY5標(biāo)記、PE-CY5.5標(biāo)記、PE-CY7標(biāo)記、RBITC標(biāo)記

免疫組化染色
SP法
（1） 脫蠟、水化 （2）PBS洗2-3次各5分鐘 （3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在
TMA上，室溫靜置10分鐘 （4）PBS洗2-3次各5分鐘 （5）抗原修復(fù)
（6）PBS洗2-3次各5分鐘 （7）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘，甩去多余液體（8）滴加Ι抗50μl,室溫靜置1小時(shí)或4℃過(guò)夜或37℃1小時(shí)（9）4℃過(guò)夜后需在37℃復(fù)溫45分鐘（10）PBS洗3次每次2分鐘
（11）滴加Ⅱ抗45-50μl,室溫靜置或37℃1小時(shí)（12）Ⅱ抗中可加入0.05%的
tween-20.（13）PBS洗3次各5分鐘（14）DAB顯色5-10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度 （15）PBS或自來(lái)水沖洗10分鐘 （16）蘇木精復(fù)染2分鐘，鹽酸酒精分化（17）自來(lái)水沖洗10-15分鐘 （18）脫水、透明、封片、鏡檢。
SABC法
（1） 脫蠟、水化 （2）PBS洗2次各5分鐘 （3）用蒸餾水或PBS配制新鮮的3%H2O2，室溫封閉5-10分鐘，用蒸餾水洗3次（4）抗原修復(fù)
（5） PBS洗5分鐘 （6）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘，甩去多余液體（7）滴加Ι抗50μl,室溫靜置1小時(shí)或4℃過(guò)夜或37℃1小時(shí)
（8）PBS洗3次各2分鐘（9）滴加*化Ⅱ抗，20℃-37℃ 20分鐘
（10）PBS洗3次各2分鐘 （11）滴加試劑SABC 20℃-30℃ 20分鐘
（12） PBS洗4次各5分鐘 （13） DAB顯色：試劑盒或自配顯色劑顯色
（14）脫水、透明、封片、鏡檢。

免疫組化問(wèn)題解答:

1 染色過(guò)強(qiáng)

原因 解決方法
a 抗體濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜
b 孵育溫度過(guò)高超過(guò)37度 一般在室溫20-28度
c DAB顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或濃度過(guò)高 顯色時(shí)間不超過(guò)5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)
2 非特異性背景染色

原因 解決方法
a 操作過(guò)程中沖洗不充分 每步?jīng)_洗3次每次5分鐘
b 組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷 可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長(zhǎng)
c 組織中含內(nèi)原性* 正常非免疫動(dòng)物血清再封閉
d 血清蛋白封閉不充分 延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間

3 染色弱

原因 解決方法 
a 抗體濃度過(guò)低、孵育時(shí)間過(guò)短 提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少 于60分鐘
b 試劑超過(guò)有效使用時(shí)間 應(yīng)更換試劑
c 操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
使試劑稀釋 （應(yīng)防止切片干燥）
d 室溫太低 低于15度 要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過(guò)夜
e 蛋白封閉過(guò)度 封閉不要超過(guò)12分鐘

4 染色陰性

原因 解決方法 
a 操作步驟錯(cuò)誤 應(yīng)重試 設(shè)陽(yáng)性對(duì)照
b 組織中無(wú)抗原 設(shè)陽(yáng)性對(duì)照以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果
c 一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤 仔細(xì)確定一抗二抗種屬無(wú)誤。

心動(dòng)加速蛋白多肽抗體保存條件：Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

避免反復(fù)凍融，保質(zhì)期一年。

免疫熒光雙重染色熒光雙染或多重染色是指將帶有不同熒光素標(biāo)記的抗體孵育在同一張切片上，鏡下觀察時(shí)將不同的顏色組合在一起，將不同的抗原表達(dá)情況一起呈現(xiàn)出來(lái)，這樣分析多個(gè)抗原的關(guān)聯(lián)性更客觀、更直接。

熒光雙染也有直接法和間接法。直接法是使用帶有不同熒光素標(biāo)記的兩個(gè)抗體同時(shí)孵育后觀測(cè)；間接法需要用到兩個(gè)不同種屬來(lái)源的一抗（例如一個(gè)鼠源抗體，一個(gè)兔源抗體），后面要選擇與一抗相對(duì)應(yīng)的二抗同時(shí)需要帶有不同的熒光素標(biāo)記（例如FITC標(biāo)記山羊抗小鼠和Cy3標(biāo)記山羊抗兔），間接法需要同時(shí)兼顧一抗和二抗的種屬關(guān)系，避免出現(xiàn)相互的交叉反應(yīng)。

相關(guān)優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品：

Anti-Annexin A11抗體,膜粘連蛋白11抗體
Anti-Annexin A13抗體*,膜粘連蛋白13抗體
Anti-phospho-APC(Ser2054),磷酸化腺瘤樣息肉抗體
Anti-phospho-APC1(Ser688),磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體
Anti-APC10抗體,細(xì)胞周期后期促進(jìn)蛋白亞基10抗體
Anti-APC11抗體,細(xì)胞周期后期促進(jìn)蛋白亞基11抗體說(shuō)明書(shū)
Anti-APC2抗體,腺瘤性結(jié)腸息肉病蛋白2抗體
Anti-phospho-APC6(Thr560),磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體
Anti-APG8A抗體,自噬相關(guān)蛋白8A抗體
Anti-Aphrodisin抗體,氣味結(jié)合蛋白抗體
Anti-APLF抗體,DNA修復(fù)酶相互作用蛋白抗體
Anti-APMAP抗體,脂肪細(xì)胞膜相關(guān)蛋白抗體
Anti-APOA1BP抗體,載脂蛋白A1結(jié)合蛋白抗體抗體
Anti-APOBEC1抗體,載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物1抗體
Anti-APOBEC3B抗體,載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物3B抗體
Anti-Apolipoprotein CI/APOC1抗體,載脂蛋白C1抗體
Anti-APOL1抗體,載脂蛋白L1抗體
Anti-APOL4抗體,載脂蛋白L4抗體
Anti-ApoM抗體,載脂蛋白M抗體
Anti-APOL5抗體,載脂蛋白L5抗體
Anti-Apolipoprotein O抗體,載脂蛋白O抗體
Anti-APPBP1抗體,β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白1抗體
Anti-Aprataxin抗體,共濟(jì)失調(diào)性眼球運(yùn)動(dòng)功能喪失相關(guān)蛋白AOA1抗體