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液相色譜常見異常峰問題及維修保養(yǎng)
閱讀：13 發(fā)布時(shí)間：2025-1-14異常的色譜峰指的是色譜圖中的無(wú)峰或出現(xiàn)負(fù)峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對(duì)稱等情況。一般來(lái)說(shuō)，異常峰是實(shí)驗(yàn)工作中較為棘手的問題。異常峰的出現(xiàn)會(huì)影響色譜分析的結(jié)果。通常情況下，峰型問題是由分離系統(tǒng)所決定的。在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來(lái)改善不好的峰型，對(duì)于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對(duì)待，從主要問題出發(fā)，一個(gè)一個(gè)加以解決。
1.色譜圖中未出峰
系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解;泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確;檢測(cè)器設(shè)置不正確
2.一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰
流動(dòng)相吸收本底高;進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣;樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。
3.所有峰均為負(fù)峰
信號(hào)電纜接反或檢測(cè)器輸出極性設(shè)置顛倒;光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。
4.所有峰均為寬峰
系統(tǒng)未達(dá)到平衡;溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確;色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低;溫度變化造成的影響。
5.所出峰比預(yù)想的小
樣品黏度過大;進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差;檢測(cè)器設(shè)置不正確.定量環(huán)體積不正確;檢測(cè)池污染;檢測(cè)器燈出現(xiàn)問題。
6.出現(xiàn)雙峰或肩峰
進(jìn)樣量過大;樣品濃度過高;保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞;保護(hù)拄或色譜柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
7.前伸峰
進(jìn)樣量或樣品濃度高，溶解樣品的溶劑較流動(dòng)相極性強(qiáng);保護(hù)柱或色譜柱污染或失效。
①柱溫低：升高柱溫;②樣品溶劑選擇不恰當(dāng)：使用流動(dòng)相作為樣品溶劑;③樣品過載：降低樣品含量;④色譜柱損壞：更換柱子。
8.拖尾峰
柱超載，降低樣品量;增加柱直徑采用較高容量的固定相;峰干擾，對(duì)樣品進(jìn)行清潔過濾;調(diào)整流動(dòng)相;硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值;柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效，更換燒結(jié)不銹鋼;加在線過濾器，對(duì)樣品進(jìn)行過濾;死體積或柱外體積過大，將連接點(diǎn)降至谷值;盡可能使用內(nèi)徑較細(xì)的連接管;柱效下降，更換柱子;采用保護(hù)柱，對(duì)柱子進(jìn)行再生。
9.出現(xiàn)平頭峰
檢測(cè)器設(shè)置不正確;進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高。
10.出現(xiàn)鬼峰
進(jìn)樣閥殘余峰，可能為上次樣品的殘余。在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來(lái)平衡和清洗系統(tǒng);樣品中存在未知物，改進(jìn)樣品的預(yù)處理;流動(dòng)相污染，更換新流動(dòng)相，盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過濾;盡可能使用HPLC級(jí)試劑;流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除。
11.峰分叉
?、俦Ｗo(hù)柱或分析柱污染：取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析,如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,拆下來(lái)清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染,運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧Ｈ绻麊栴}仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。②樣品溶劑不溶于流動(dòng)相改變樣品溶劑,如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。
12.峰變形
樣品過載，減少樣品載量。
13.早出的峰變形
樣品溶劑選擇不恰當(dāng) ①減少進(jìn)樣體積 ②運(yùn)用低極性樣品溶劑
14.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
柱外效應(yīng) ①調(diào)整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路) ②使用小體積的流通池
15.酸性或堿性化合物的峰拖尾
緩沖不合適①使用濃度50～100 mM的緩沖液②使用Pka等于流動(dòng)相pH值的緩沖液
16.額外的峰
(1)樣品中有其他組分：正?，F(xiàn)象;
(2)前一次進(jìn)樣的洗脫峰：①增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率②提高流速;
(3)空位或鬼峰：①檢查流動(dòng)相是否純凈 ②使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 ③減少進(jìn)樣體積。
液相色譜柱的日常維護(hù)液相色譜柱是一種用于液體色譜分析儀器?！ ∫合嗌V柱的日常維護(hù)： 1、每次開機(jī)時(shí)，流速和柱壓要逐漸增加，突然迅速增加，會(huì)使柱床受到?jīng)_擊，引起紊亂，產(chǎn)生空隙 2、在進(jìn)樣前使色譜系統(tǒng)充分平衡，是否平衡可由基線加以判斷 3、在進(jìn)樣前，檢查色譜系統(tǒng)的各個(gè)接頭，通常由此能發(fā)現(xiàn)是否有漏液現(xiàn)象。如有漏液，空氣會(huì)從漏縫進(jìn)入系統(tǒng)引起基線漂移，影響峰高和峰面積的重復(fù)性 4、不要把柱接頭上得太緊，否則易損壞接頭螺紋，引起滲漏 5、不要把柱子放在有氣流的地方或直接放到陽(yáng)光下，氣流和陽(yáng)光都會(huì)使柱子產(chǎn)生溫度梯度造成基線漂移；如果懷疑基線漂移是由溫度梯度引起的，可以設(shè)法使柱子恒溫 6、若儀器用做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)很多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長(zhǎng)柱壽命 7、如果懷疑樣品會(huì)污染色譜柱，可以用合適的溶劑幾百毫升、慢慢沖洗柱子過夜，第二天早晨再用流動(dòng)相重新平衡柱子約3min、 8、在因裝卸、更換、貯存等而挪動(dòng)柱子時(shí)，動(dòng)作要輕，不要使其受到碰撞，以免柱床因震動(dòng)產(chǎn)生空隙或通道 9、柱要加標(biāo)簽，新舊分開，不要放在溫度變化很大的地方 10、液相色譜柱柱子不用或貯藏時(shí)，應(yīng)封閉并貯存在惰性溶劑中