大鼠Elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠IL-6 水平。用純化的大鼠IL-6抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT) ,再與HRP標(biāo)記的T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下 轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠IL-6 濃度。
1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為0 的S0 號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5 倍,zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實(shí)際濃度。
4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
6. 樣本收集后及時進(jìn)行檢測。1-3天左右檢測的樣本可儲存在4℃?zhèn)溆?。如有特殊原因需要周期性收集?biāo)本,請將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或- 70℃條件下保存,避免反復(fù)凍融。