本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大白鼠類風(fēng)濕因子（RF）水平。用純化的大白鼠類風(fēng)濕因子（RF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入類風(fēng)濕因子（RF），再與HRP 標記的類風(fēng)濕因子（RF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。

操作步驟

1.標準品的稀釋：本大白鼠類風(fēng)濕因子RF試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

40 U/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

20 U/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

10 U/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

0.5 U/L 2 號標品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

0.25 U/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4.配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，此重復(fù)5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：大白鼠類風(fēng)濕因子RF每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行。 

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