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江蘇菲亞生物科技有限公司

微藻基因組提取的方法概述

時(shí)間:2017-1-16閱讀:498
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微藻基因組提取的方法主要有以下幾種:

1、采用CTAB法

2、收集藻體

3、液氮研磨

4、加入CTAB提取液

5、*抽提、乙醇沉淀

6、洗滌

   一般來(lái)說(shuō),液氮研磨是的方法。原因如下:

1、液氮冷凍使得藻體變脆,易于破碎。

2、液氮研磨的力度,一般不會(huì)對(duì)基因組DNA造成機(jī)械損傷。

3、在低溫下,各種酶包括核酸酶的活性較低,可以zui大程度防止核酸的降解,這點(diǎn)在制備RNA的時(shí)候,尤為重要。所以,在制備微藻基因組時(shí),應(yīng)該盡量用液氮研磨。

    當(dāng)然,用液氮往往比較麻煩;并且有潛在的危險(xiǎn),所以在某些情況下,也可以用一些替代性的方法,主要分為三類:

*類、常溫研磨。即用玻璃勻漿器或者組織勻漿機(jī)來(lái)破碎細(xì)胞,但需要做一些與實(shí)驗(yàn)來(lái)確定研磨的時(shí)間/力度。

第二類、酶解。即用針對(duì)于研究對(duì)象細(xì)胞壁成分的酶,來(lái)酶解細(xì)胞壁,進(jìn)而達(dá)到破碎細(xì)胞的目的。常用的酶有果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶、*、海螺酶、蝸牛酶以及DRISELASW 崩潰酶,同樣需要做預(yù)試驗(yàn)確定酶的種類和用量,以及酶解時(shí)間。

第三類、使用強(qiáng)的裂解液。例如異硫氰酸胍等,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間浸泡,可以“溶解”藻細(xì)胞。

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