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H522細(xì)胞(說明書索取） 技術(shù)文章：

由于質(zhì)?？梢詮?fù)制擴(kuò)增，相比起化學(xué)合成來說，這就能夠顯著降低制備siRNA的成本。因?yàn)橘|(zhì)粒的價(jià)錢大約是3000多人民幣，還不到化學(xué)合成1條21nt的RNA價(jià)格的一半，但是就可以自行制備siRNA而不受數(shù)量的限制。

在這里為大家介紹幾種不同的siRNA合成質(zhì)粒，但是大家要注意的是這里介紹的siRNA質(zhì)粒是不同于體外轉(zhuǎn)錄合成RNA的質(zhì)粒，因?yàn)檫@里制備的是用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的siRNA，而不是長(zhǎng)鏈的RNA（長(zhǎng)鏈的dsRNA不適宜用在哺乳動(dòng)物細(xì)胞

因?yàn)闀?huì)引發(fā)非特異抑制pSilencer siRNA 表達(dá)載體系列是用于在培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)siRNA的一系列載體。

在載體上包含有RNA聚和酶III （Pol III）啟動(dòng)子，氨芐抗性基因和大腸桿菌復(fù)制子，只要將編碼一小段對(duì)應(yīng)目的基因特異序列的、其RNA能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)（就是回文結(jié)構(gòu)）的DNA序列插入載體中Pol III 啟動(dòng)子的下游，轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞，載體就能表達(dá)出發(fā)夾結(jié)構(gòu)的RNA，這種RNA很快在細(xì)胞中加工成為siRNA。

這些表達(dá)載體已經(jīng)成功的在Hela細(xì)胞中抑制了包括Cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在內(nèi)的多個(gè)基因的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)表明：能夠被化學(xué)合成或者體外合成的siRNAs抑制的基因同樣可以被表達(dá)相同序列的載體生成的siRNAs抑制。

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