MIA PaCa-2細(xì)胞（說明書索?。?/h1>

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MIA PaCa-2細(xì)胞（說明書索?。?nbsp;技術(shù)文章：

RNAi在哺乳動物細(xì)胞中通常用于阻斷特定基因的表達(dá)從而研究基因的功能，常見的做法是將靶向特定基因的大約21堿基長短的雙鏈sirnas(small interfering RNAs)，或者是45—50-mer的發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA（small hairpin RNA, shRNA）轉(zhuǎn)染到細(xì)胞。

shRNA在細(xì)胞內(nèi)會自動被加工成為siRNA，從而引發(fā)基因沉默或者表達(dá)抑制?，F(xiàn)在有多個報道說通過質(zhì)粒表達(dá)siRNAs同樣可以抑制特定基因的表達(dá)。

盡管細(xì)節(jié)各有不同，但載體大都是用PolIII啟動子啟動編碼shRNA(small hairpin RNA)的序列。選用PolIII啟動子的原因在于這個啟動子總是在離啟動子一個固定距離的位置開始轉(zhuǎn)錄合成RNA，遇到4—5個連續(xù)的U即終止，非常。

當(dāng)這種帶有PolIII 啟動子和shRNA編碼序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞時，這種能表達(dá)siRNA的質(zhì)粒確實能夠下調(diào)特定基因的表達(dá)，抑制范圍包括外源基因和內(nèi)源基因。

采用這種方法的優(yōu)點在于，通過siRNA表達(dá)質(zhì)粒的選擇標(biāo)記，siRNA載體能夠更長時間地抑制目的基因表達(dá)。

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