細胞：FRH-0201細胞
中文名稱：人膽管癌細胞
生長特性：貼壁細胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
(網(wǎng)絡信息主針對網(wǎng)絡推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；)
篩選了約50,000個化學小分子。就像一個普通的圖書館里收藏有各種不同的圖書一樣，這個組合文庫中也包含了各種不同的有機小分子化合物。
通過這次篩選分類，發(fā)明了一種新方法來識別具有控制干細胞分化為神經(jīng)元的能力的分子。
他們將一個編碼熒光素酶的報告基因?qū)肱咛バ园┘毎?，使該基因插入到一個只在神經(jīng)元中表達的基因的啟動子序列下游。然后研究人員將這些胚胎性癌細胞放置到培養(yǎng)板獨立的小孔內(nèi)，每個孔內(nèi)添加文庫中不同的小分子。
如果任何小孔中有經(jīng)過改造的胚胎性癌細胞被誘導為神經(jīng)元，這些神經(jīng)元就會表達熒光素酶，發(fā)出熒光。胚胎性癌起源于具有多分化潛能的原始sheng殖細胞，為高度惡性腫瘤，發(fā)病高峰在30～40歲，嬰兒及兒童也可發(fā)生。
一旦發(fā)現(xiàn)一些細胞經(jīng)某種小分子處理后分化為神經(jīng)元，就用精確度更高的測定方法來進一步證實，包括用特殊標記對細胞染色，顯微鏡下檢查個體細胞形狀等。神經(jīng)元具有獨_特的圓形胞體和不對稱的分裂過程。
最后，篩選出一些能誘導神經(jīng)元分化的分子，而他們選取其中一個叫做TWS119,的小分子進行深入研究。
當他們檢查TWS119誘導神經(jīng)元分化的詳細過程時，發(fā)現(xiàn)該分子與一種細胞激酶--糖原合成激酶-3beta (GSK-3beta)結(jié)合。GSK-3beta是一種多功能信號傳導酶，與一些生理信號傳導過程有關(guān)，并通過附加一個磷酸基到酶上，調(diào)節(jié)其它酶的活性。
操縱GSK-3beta會誘導干細胞分化為神經(jīng)元，--這一事實揭示了干細胞向神經(jīng)元轉(zhuǎn)化過程中復雜的信號傳導級聯(lián)反應中的一些基本信息。TWS119調(diào)節(jié)GSK-3beta活動這一事實又說明，TWS119可能為了解控制干細胞命運的機制提供新線索，最終用于體內(nèi)干細胞療法。
Schultz 和 Ding正著手研究探明這種結(jié)合如何引導干細胞分化為神經(jīng)元的確切機制。
