細(xì)胞:PC12細(xì)胞
中文名稱(chēng):大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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研究揭示腫瘤細(xì)胞穩(wěn)定復(fù)制奧秘
與正常細(xì)胞相比,癌細(xì)胞的分裂速度很快,其基因組“質(zhì)量”卻相當(dāng)穩(wěn)定——它們是怎么做到的?
首_次發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞在細(xì)胞分裂(cell pision)的多個(gè)階段都存在DNA復(fù)制行為,并指出這是腫瘤細(xì)胞維持基因組穩(wěn)定性的關(guān)鍵。
一個(gè)完整的細(xì)胞分裂(cell pision)周期分為:復(fù)制前期(G1)、DNA復(fù)制期(S)、復(fù)制后期(G2)和有絲分裂期(M)。
學(xué)術(shù)界過(guò)去普遍認(rèn)為,DNA復(fù)制只能發(fā)生在S期。腫瘤細(xì)胞不僅在S期快速進(jìn)行DNA復(fù)制,還會(huì)在有絲分裂階段,即M期“加班”復(fù)制DNA。
腫瘤細(xì)胞在S期的快速?gòu)?fù)制留下了很多DNA的損傷,這讓DNA變得很不穩(wěn)定,也使自身比正常細(xì)胞更容易受傷;而M期的DNA復(fù)制是腫瘤細(xì)胞特_有的,并且對(duì)維持腫瘤細(xì)胞基因的穩(wěn)定性特別重要。
專(zhuān)家表示,這一研究解決了一個(gè)長(zhǎng)期懸而未決的科學(xué)問(wèn)題,將在核酸修復(fù)、復(fù)制和癌癥(cancer)研究等領(lǐng)域產(chǎn)生重要影響。
此項(xiàng)研究為將來(lái)的腫瘤靶向治療提供了一個(gè)新的潛在治療靶點(diǎn)。如果能想辦法中止腫瘤細(xì)胞在有絲分裂階段的DNA復(fù)制,就能通過(guò)削弱腫瘤細(xì)胞DNA的穩(wěn)定性控制腫瘤細(xì)胞的增殖。