細(xì)胞：Hep-3B細(xì)胞
中文名稱(chēng)：人肝癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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在艾滋病(AIDS)面前，嚙齒動(dòng)物似乎比人類(lèi)更為強(qiáng)大。大鼠和小鼠對(duì)人體免疫缺損病毒(HIV)具有天生的抵抗能力——這一情況也導(dǎo)致研究人員尋找一種AIDS小型動(dòng)物模型的夙愿一直無(wú)法實(shí)現(xiàn)。
然而發(fā)現(xiàn)，一種經(jīng)過(guò)基因改造的小鼠很容易感染HIV，這就為AIDS藥物的研制提供了新的幫助。
通過(guò)加入能夠使人類(lèi)具有易感性的多種基因化合物，一直在嘗試培育可感染HIV的嚙齒動(dòng)物，然而進(jìn)展極為緩慢。
向小鼠體內(nèi)移植了兩種人類(lèi)攜帶的關(guān)鍵分子——病毒用它們來(lái)傳染免疫細(xì)胞，其表面受體為CD4和CCR5。但是HIV在這些動(dòng)物體內(nèi)并不能有效地進(jìn)行自我復(fù)制，從而導(dǎo)致病毒數(shù)量低于其在人體中的水平。
這一復(fù)制過(guò)程是許多有效抗HIV藥物——例如蛋白酶抑制劑——的靶點(diǎn)，而這一小鼠模型尚無(wú)法評(píng)估此類(lèi)化合物。也正是由于這些限制，這一模型對(duì)于研究HIV究竟如何導(dǎo)致AIDS亦作用有限。
向這些經(jīng)過(guò)改造的小鼠中添加新的基因，從而避開(kāi)這些殘留的障礙。并不認(rèn)為這一模型在所有情況下都適用。
這種小鼠是否能夠用來(lái)評(píng)估那些在HIV開(kāi)始自我復(fù)制之前就對(duì)其進(jìn)行打擊的AIDS藥物。研究人員利用兩種已經(jīng)批準(zhǔn)上市的藥物——T-20，能夠阻止HIV進(jìn)入細(xì)胞；
Sustiva，抑制病毒核糖核酸(RNA)轉(zhuǎn)變成脫氧核糖核酸(DNA)所必需的逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程——對(duì)這種小鼠進(jìn)行了測(cè)試。
與人類(lèi)的情況類(lèi)似，在這兩項(xiàng)試驗(yàn)中，經(jīng)過(guò)基因改造的小鼠體內(nèi)的HIV水平下降了90%。試驗(yàn)直接導(dǎo)致小鼠免疫細(xì)胞數(shù)量的減少，這點(diǎn)也與人類(lèi)試驗(yàn)一致。
