細(xì)胞:RF/6A細(xì)胞
中文名稱:猴脈絡(luò)叢視網(wǎng)膜內(nèi)皮
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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一種細(xì)胞應(yīng)激通路稱為未折疊蛋白反應(yīng)(UPR)既可以激活也可以降低死亡受體5蛋白(DR5),它能促進(jìn)或預(yù)防細(xì)胞自sha。該理論認(rèn)為初始應(yīng)激阻止細(xì)胞自sha或凋亡,以使細(xì)胞有機(jī)會去適應(yīng),但是如果應(yīng)激持續(xù)下去,它最終觸發(fā)凋亡。(人Calu-3細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 人肺腺癌細(xì)胞)
蛋白質(zhì)幫助細(xì)胞適應(yīng)或凋亡,這項研究使得所有這種大的復(fù)雜的爛攤子的最美麗簡化?;旧献R別和精確定位與這一開關(guān)決定有關(guān)的特殊蛋白并解釋這一決定是怎么做的。(人ES-2細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞)
細(xì)胞中蛋白折疊多數(shù)發(fā)生在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER),但是如果這個過程出現(xiàn)差錯,未折疊蛋白累積,對ER產(chǎn)生應(yīng)激。這可觸發(fā)UPR,關(guān)閉翻譯,降低未折疊蛋白,增加蛋白質(zhì)折疊機(jī)制的產(chǎn)生。然而,如果ER應(yīng)激沒有解決,UPR也能誘導(dǎo)凋亡。(人BIU-87細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 人膀胱癌細(xì)胞)
兩個主要因素控制UPR-IRE1a和PERK。IRE1a通過激活轉(zhuǎn)錄因子XBP1促進(jìn)細(xì)胞存活,驅(qū)動細(xì)胞存活基因的表達(dá)。另一方面,PERK激活一種轉(zhuǎn)錄因子稱為CHOP,它反過來驅(qū)動促凋亡因子DR5的表達(dá)。(人H295R細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞)
已證實(shí)CHOP激活DR5,表明它是一種細(xì)胞自主過程。但發(fā)現(xiàn)IRE1a抑制DR5,直接降解它的mRNA通過一種稱為調(diào)節(jié)IRE1a依賴的降解(RIDD)過程。人類癌細(xì)胞系出于ER應(yīng)激中的IRE1a抑制即可以防護(hù)DR5 mRNA降解又可以增加細(xì)胞凋亡。(人H157細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞)