細(xì)胞:RGC-5細(xì)胞
中文名稱(chēng):小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
RGC-5細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用,僅供參考,細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢(xún)細(xì)胞庫(kù)管理員,以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn),操作前,如果有不明白之處,先咨詢(xún)細(xì)胞庫(kù)管理員,避免不必要的損失;)
利用光遺傳學(xué)"遙控"癌細(xì)胞的行為
為了解細(xì)胞信號(hào)的動(dòng)態(tài),研究需要將膜受體蛋白激活和使其失活,膜受體蛋白作為一個(gè)細(xì)胞內(nèi)外世界之間的中轉(zhuǎn)站。(b.End3細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù) 腦血管內(nèi)皮細(xì)胞)理想情況下,這種激活在短時(shí)間(幾秒到幾分鐘)以及近的目標(biāo)位置(微米到毫米)內(nèi)發(fā)生。
如此高水平的活化精密度不能使用當(dāng)前的藥理學(xué)和遺傳學(xué)的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)。(Meth-A細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù))光遺傳學(xué)利用光來(lái)控制細(xì)胞的活性,以及具有在時(shí)間和空間上精確地被應(yīng)用和移動(dòng)(施加和除去)的優(yōu)點(diǎn)。
重新設(shè)計(jì)受體酪氨suan激酶(RTKs),(小鼠Renca細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù) 小鼠腎癌細(xì)胞)在光的控制下,感測(cè)生長(zhǎng)因子和激素的必要的細(xì)胞表面受體。當(dāng)一個(gè)信號(hào)分子結(jié)合到細(xì)胞表面的RTKs,兩種受體相互結(jié)合的過(guò)程稱(chēng)為二聚化作用。
這個(gè)過(guò)程會(huì)激活細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。(人Hek-293細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù) 人胚腎細(xì)胞)將哺乳動(dòng)物的RTKs的那些部分與光-氧-電壓傳感領(lǐng)域(鑒定黃綠藻的可逆光傳感器)結(jié)合。在工程化受體中,二聚化步驟和隨后的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)在可以通過(guò)光隨著藻蛋白光感打開(kāi)和關(guān)閉,以及彼此結(jié)合。
在腫瘤細(xì)胞中,工程受體的活化導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)變化,(人Hela細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù) 人宮頸細(xì)胞)細(xì)胞增殖和基因表達(dá),增加癌癥的惡性程度的特性。在血細(xì)胞中,活化導(dǎo)致細(xì)胞出芽,典型的新血管形成。
RTKs通過(guò)光激活二聚化作用調(diào)節(jié)發(fā)育是哺乳動(dòng)物受體的光激活二聚化作用的第一個(gè)實(shí)例。(人Intestine 407細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù) 人小腸細(xì)胞)光控制下的RTK提供了強(qiáng)大的光遺傳學(xué)的方法來(lái)啟動(dòng)細(xì)胞信號(hào)和操縱細(xì)胞的行為。
新開(kāi)發(fā)的受體引發(fā)癌癥和血液中內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)雜的細(xì)胞活動(dòng)。(SBC-7細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù) 肺癌細(xì)胞)這些細(xì)胞代表根據(jù)光控行為的新模型,以及能夠用新的方法來(lái)確定藥物。
這與癌細(xì)胞的相反,細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的不受控制的活化導(dǎo)致惡性腫瘤有關(guān)的特征,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的光激活可能拯救退行性疾病的細(xì)胞存活和功能。