細胞:KLE細胞
中文名稱:人子宮內(nèi)膜腺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:F12K+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
KLE細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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RNA毒性積累是導致C9orf72引發(fā)ALS和FTD這兩種疾病的原因
重復擴張(指產(chǎn)生一前一后重復的RNA序列的額外版本的突變)是造成40多種遺傳疾病的原因,它們一般會導致神經(jīng)問題和神經(jīng)肌肉問題。
C9orf72六核苷酸重復擴張已被發(fā)現(xiàn)(通派細胞庫供應:BT-549細胞)是造成“肌wei縮側(cè)索硬化”(ALS)和“額顳癡呆” (FTD)這兩種疾病的原因。正常的C9orf72含有多達25個重復片段,而患病者的該基因則會含有數(shù)千個。
研究中找出了六核苷酸重復擴增(HRE)結(jié)構(gòu)多態(tài)性導致ALS / FTD的病理分子機制。(通派細胞庫供應:U937細胞)HRE形成DNA和RNA的G-四鏈不同的結(jié)構(gòu),促進RNA DNA雜交(R-循環(huán))。
結(jié)構(gòu)多態(tài)性引起的轉(zhuǎn)錄終止的HRE區(qū)域的重復長度依賴的積累。(通派細胞庫供應:C2C12細胞)這些轉(zhuǎn)錄重復綁定到核糖核蛋白的構(gòu)象依賴性。
研究表明,(通派細胞庫供應:6t-cem細胞 )RNA毒性的增加在ALS/FTD兩種疾病中是造成與C9orf72相關(guān)病理的原因。
轉(zhuǎn)錄的C9orf72六核苷酸重復片段被發(fā)現(xiàn)以一種依賴于構(gòu)形的方式(通派細胞庫供應:1301細胞)與特定的核糖核蛋白如核仁蛋白相結(jié)合;因此,核仁蛋白被錯誤局部化,并且在功能上受損,導致“核仁應激”。