細(xì)胞：WiDr細(xì)胞
中文名稱：人大腸癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
WiDr細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；)
HSP90β反義核酸載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞HSP90β蛋白的表達(dá)
了解HSP90β反義核酸轉(zhuǎn)染細(xì)胞中HSP90β蛋白的表達(dá)。
通過lipofectamine介導(dǎo)將HSP90β反義核酸重組子pcDNA-HSP90轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞系SGC7901、人胃癌多藥耐藥細(xì)胞系SGC7901/VCR、人肝癌細(xì)胞系HCC7402及人食管癌細(xì)胞系Ec109。
(HBZY-1細(xì)胞：貼壁細(xì)胞 通派細(xì)胞庫(kù)培養(yǎng)條件：90% 低糖DMEM、10% FBS)
經(jīng)用G418進(jìn)行篩選，對(duì)篩選出的陽(yáng)性克隆用western blot檢測(cè)HSP90β蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:pcDNA-HSP90轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞系SGC7901，人胃癌耐藥細(xì)胞系SGC7901/VCR，人肝癌細(xì)胞系HCC7402及人食管癌細(xì)胞系Ec109后，用G418篩選出的陽(yáng)性克隆，分別被命名為:AH-SGC7901，AH-SGC7901/VCR，AH-HCC7402及AH-Ec109。
(HBMEC細(xì)胞：貼壁細(xì)胞 通派細(xì)胞庫(kù)培養(yǎng)條件：90% DMEM、10% FBS)
Westernblot檢測(cè)結(jié)果表明，AH-SGC7901，AH-SGC7901/VCR，AH-HCC7402及AH-Ec109表達(dá)的HSP90β蛋白低于其親本細(xì)胞。
(HConEpic細(xì)胞：貼壁細(xì)胞 通派細(xì)胞庫(kù)培養(yǎng)條件：90% 高糖DMEM、10% FBS)
結(jié)論:HSP90β反義核酸可封閉HSP90βmRNA，使pcDNA-HSP90轉(zhuǎn)染的細(xì)胞AH-SGC7901，AH-SGC7901/VCR，AH-HCC7402及AH-Ec109表達(dá)的HSP90β蛋白減少，為研究HSP90下調(diào)對(duì)腫瘤細(xì)胞生 物學(xué)活性的影響提供了實(shí)驗(yàn)材料。
