細胞:KMH-2細胞
中文名稱:人甲狀腺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
KMH-2細胞培養(yǎng)基:MEM+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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發(fā)現(xiàn)在不同的細胞類型中廣大的H3K4me3區(qū)域標記了不同的基因。研究人員認識到根據(jù)廣大H3K4me3區(qū)域的染色質(zhì)定位,他們就可以將肝細胞與肌肉細胞或腎細胞區(qū)分開來。
BT-474細胞:貼壁細胞 通派細胞庫培養(yǎng)條件:90% RPMI-1640、10% FBS
此外,他們還注意到這些H3K4me3區(qū)域往往標記的是對細胞功能至關(guān)重要,或是幫助細胞確立身份的一些基因。例如,在胚胎干細胞中它們出現(xiàn)在控制細胞特化能力的一些基因上。
BV2細胞:半懸浮半貼壁 通派細胞庫培養(yǎng)條件:90% DMEM高糖、10% FBS
在成體神經(jīng)祖細胞中利用rnai技術(shù),進一步證實這些標記表明了細胞的身份。當利用RNAi來下調(diào)攜帶大塊H3K4me3標記的一些基因時,發(fā)現(xiàn)損害了細胞增殖和生成神經(jīng)元的能力。
C57細胞:貼壁細胞 通派細胞庫培養(yǎng)條件:90% 高糖DMEM、10% FBS
當研究人員沉默只有短H3K4me3標記區(qū)域或根本沒有H3K4me3區(qū)域的基因時,祖細胞仍然正常分裂。換句話說,大H3K4me3標記區(qū)域的存在有可能幫助了細胞終身維持身份。盡管細胞利用了幾種方法來確立它們的身份,發(fā)現(xiàn)了一種新的標記。