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小鼠核仁磷酸蛋白(NPM)ELISA檢測試劑盒

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更新時間:2016-06-22 11:09:22瀏覽次數(shù):122次

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小鼠核仁磷酸蛋白(NPM)ELISA檢測試劑盒注意事項
1.試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大,否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間,從而影響實驗的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性;一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器。
3.孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育,嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進(jìn)行。
4.洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
6.建議實驗前預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
7.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個標(biāo)本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商,如果因運輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

小鼠核仁磷酸蛋白(NPM)ELISA檢測試劑盒操作步驟
1. 取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。
2. 取出酶標(biāo)板,按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水;
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素;(不含空白對照孔,切忌:生物素只加樣品孔!)
5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液;(不含空白對照孔)
6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后,37℃孵育反應(yīng) 1小時;(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干;
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對照孔)
10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘;
11.各孔加入50μl終止液,終止反應(yīng);

結(jié)果判斷
1. 30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值;
2. 以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制曲線圖;
3. 根據(jù)樣品的OD值查找對應(yīng)的濃度范圍;

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