產(chǎn)品名稱:人連接橋粒斑珠蛋白(JUP)ELISA試劑盒
英文名稱:human Junction Plakoglobin (JUP) ELISA Kit
貨號: ZK-H2888
規(guī)格: 96T
種屬: human
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人連接橋粒斑珠蛋白(JUP)ELISA試劑盒操作步驟:
1. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
5. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
6. 溫育:操作同3。
7. 洗滌:操作同5。
8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
10. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
人連接橋粒斑珠蛋白(JUP)ELISA試劑盒操作注意:
1. 試劑準(zhǔn)備:準(zhǔn)備一次實(shí)驗(yàn)所需要的酶標(biāo)條,其它的可從微孔板上拆下,密封,按照說明書要求保存,以備下次使用。
2. 加樣:實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。加樣時注意不要有氣泡,將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。加樣或加試劑時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。因此,一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
3. 溫育:為防止樣品蒸發(fā),實(shí)驗(yàn)時請將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi),以避免液體蒸發(fā),洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài),同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。
4. 洗滌:充分的洗滌非常重要,在每次洗滌過程中,都要將洗滌液*甩干。洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí) 驗(yàn)過程中。
5. 反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘觀察一次),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
6. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
7. 如果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)濕度低于60%,推薦使用加濕器提高濕度水平。
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